Nature.comን ስለጎበኙ እናመሰግናለን።እየተጠቀሙበት ያለው የአሳሽ ስሪት የተወሰነ የሲኤስኤስ ድጋፍ አለው።ለበለጠ ልምድ፣ የዘመነ አሳሽ እንድትጠቀም እንመክርሃለን (ወይም የተኳኋኝነት ሁነታን በኢንተርኔት ኤክስፕሎረር አሰናክል)።እስከዚያው ድረስ ቀጣይ ድጋፍን ለማረጋገጥ ጣቢያውን ያለ ቅጦች እና ጃቫስክሪፕት እናቀርባለን።
Toxoplasma gondii በሴሉላር ውስጥ የሚገኝ ፕሮቶዞአን ጥገኛ ተውሳክ ሲሆን የተበከለውን አስተናጋጅ ማይክሮ ኤንቬሮን የሚያስተካክል እና የአንጎል ዕጢ እድገት መከሰት ጋር ተያይዞ ይታወቃል.በዚህ ጥናት ውስጥ፣ exosomal miRNA-21 ከ Toxoplasma ኢንፌክሽን የአንጎል ዕጢ እድገትን እንደሚያበረታታ እንገምታለን።ከ Toxoplasma-infected BV2 microglia የሚመጡ exosomes ተለይተው ይታወቃሉ እና የ U87 glioma ሕዋሳት ውስጣዊነት ተረጋግጧል.ኤክሶሶማል የማይክሮ አር ኤን ኤ አገላለጽ መገለጫዎች ከ Toxoplasma gondii እና ከዕጢ መደርደር ጋር የተያያዙ የማይክሮ አር ኤን ኤ እና ማይክሮ አር ኤን ኤ-21A-5p ድርድሮችን በመጠቀም ተንትነዋል።በተጨማሪም የኤምአርኤን መጠን ከዕጢ ጋር የተገናኙ ጂኖች በ U87 glioma ሕዋሳት ውስጥ የሚገኙትን ሚአር-21 ደረጃዎችን በ exosomes ውስጥ በመቀየር እና የ exosomes በሰው U87 glioma ሴል ስርጭት ላይ ያለውን ተጽእኖ መርምረናል።በ Toxoplasma gondii በተበከሉት የ U87 glioma ሕዋሳት exosomes ውስጥ የማይክሮ አር ኤን ኤ-21 አገላለጽ ይጨምራል እና የፀረ-ቲሞር ጂኖች (FoxO1 ፣ PTEN እና PDCD4) እንቅስቃሴ ቀንሷል።በ Toxoplasma የተበከሉት ከ BV2 የተገኙ ኤክሶሶሞች የ U87 glioma ሕዋሳት እንዲባዙ ያደርጋሉ።ኤክሶሶም የ U87 ሴሎችን እድገትን ያነሳሳል የመዳፊት እጢ ሞዴል።በ Toxoplasma በተበከለው BV2 ማይክሮግሊያ ውስጥ ያለው exosomal miR-21 መጨመር የፀረ-ቲሞር ጂኖችን በመቆጣጠር በ U87 glioma ሕዋሳት ውስጥ እንደ የሕዋስ እድገት አበረታች ጠቃሚ ሚና ሊጫወት እንደሚችል እንጠቁማለን።
እ.ኤ.አ. በ 2018 በዓለም ዙሪያ ከ 18.1 ሚሊዮን በላይ የላቁ ካንሰር ጉዳዮች እንደተገኙ ይገመታል ፣ ወደ 297,000 የሚጠጉ የማዕከላዊ የነርቭ ስርዓት ዕጢዎች በየዓመቱ (ከሁሉም ዕጢዎች 1.6%)።ከዚህ ቀደም የተደረጉ ጥናቶች እንደሚያሳዩት ለሰው ልጅ የአንጎል ዕጢዎች ተጋላጭነት መንስኤዎች የተለያዩ የኬሚካል ውጤቶች፣ የቤተሰብ ታሪክ እና የጭንቅላት ቴራፒዩቲካል እና የመመርመሪያ መሳሪያዎች ionizing ጨረር ይገኙበታል።ይሁን እንጂ የእነዚህ አደገኛ በሽታዎች ትክክለኛ መንስኤ አይታወቅም.በግምት 20% የሚሆነው የካንሰር በሽታ በዓለም ዙሪያ በቫይረሶች፣ ባክቴሪያዎች እና ጥገኛ ተህዋሲያን ጨምሮ በተላላፊ ወኪሎች የሚከሰቱ ናቸው3፣4።ተላላፊ በሽታ አምጪ ተህዋሲያን እንደ ዲኤንኤ መጠገን እና የሴል ዑደቱን የመሰሉ የሴል ዘረመል ዘዴዎችን ያበላሻሉ እና ወደ ሥር የሰደደ እብጠት እና በሽታ የመከላከል ስርዓት መጎዳት5።
ከሰው ካንሰር ጋር የተያያዙ ተላላፊ ወኪሎች የሰው ፓፒሎማቫይረስ እና ሄፓታይተስ ቢ እና ሲ ቫይረሶችን ጨምሮ በጣም የተለመዱ የቫይረስ በሽታ አምጪ ተህዋሲያን ናቸው.ጥገኛ ተውሳኮች በሰው ልጅ ነቀርሳ እድገት ውስጥ ትልቅ ሚና ሊጫወቱ ይችላሉ.በርካታ ጥገኛ ዝርያዎች ማለትም Schistosoma, Opishorchis viverrini, O. felineus, Clonorchis sinensis እና Hymenolepis nana, በተለያዩ የሰዎች ነቀርሳ ዓይነቶች 6,7,8.
Toxoplasma gondii በሴሉላር ውስጥ የሚገኝ ፕሮቶዞአን ሲሆን ይህም የተበከሉትን የሆድ ሴሎች ማይክሮ ኤንቬሮን ይቆጣጠራል.ይህ ጥገኛ ተውሳክ በግምት 30% የሚሆነውን የዓለም ህዝብ እንደሚበክል ይገመታል፣ ይህም መላውን ህዝብ 9,10 አደጋ ላይ ይጥላል።ቶክሶፕላስማ ጎንዲ ማዕከላዊውን የነርቭ ሥርዓትን (CNS)ን ጨምሮ አስፈላጊ የአካል ክፍሎችን ሊበክል እና እንደ ገዳይ ገትር እና ኤንሰፍላይትስ ያሉ ከባድ በሽታዎችን ያስከትላል በተለይም የበሽታ መቋቋም አቅም የሌላቸው በሽተኞች9።ይሁን እንጂ ቶክሶፕላዝማ ጎንዲ የሕዋሳትን እድገት እና የበሽታ መቋቋም አቅም ባላቸው ግለሰቦች ላይ የሚሰጠውን ምላሽ በማስተካከል የተበከለውን አስተናጋጅ አካባቢ ሊለውጥ ይችላል ይህም አሲምፕቶማቲክ ስር የሰደደ ኢንፌክሽን9,11 እንዲቆይ ያደርጋል።የሚገርመው፣ በቲ.ጎንዲ ስርጭት እና የአንጎል ዕጢ መከሰት መካከል ያለውን ትስስር ከግምት ውስጥ በማስገባት፣ አንዳንድ ሪፖርቶች እንደሚጠቁሙት ሥር በሰደደ የቲ.
ኤክሶሶም ፕሮቲን እና ኑክሊክ አሲዶችን ጨምሮ ባዮሎጂያዊ ይዘትን ከአጎራባች ህዋሶች የሚያቀርቡ ኢንተርሴሉላር ኮሙኒኬተሮች በመባል ይታወቃሉ።Exosomes እንደ ፀረ-አፖፕቶሲስ, አንጂዮጄኔሲስ እና በእብጠት ማይክሮ ኤንቬንሽን ውስጥ ያሉ ሜታስታሲስ የመሳሰሉ ከእጢ-ነክ ባዮሎጂያዊ ሂደቶች ላይ ተጽእኖ ሊያሳድሩ ይችላሉ.በተለይም ማይአርኤን (ሚአርኤን)፣ ወደ 22 ኑክሊዮታይድ ርዝመት ያላቸው ትናንሽ ኮዲንግ ያልሆኑ አር ኤን ኤዎች ከ30% በላይ የሰውን ኤምአርኤን የሚቆጣጠሩት ከጽሑፍ ግልባጭ በኋላ ጠቃሚ የሆኑ የጂን መቆጣጠሪያዎች ናቸው በሚአርአና በተፈጠረው የዝምታ ውስብስብ (miRISC)።Toxoplasma gondii በተበከሉ አስተናጋጆች ውስጥ ሚአርኤን መግለጫን በመቆጣጠር ባዮሎጂያዊ ሂደቶችን ሊያስተጓጉል ይችላል።አስተናጋጅ ማይአርኤን የተህዋሲያንን የመትረፍ ስትራቴጂ ለማሳካት አስተናጋጅ ባዮሎጂካል ሂደቶችን ለመቆጣጠር ጠቃሚ ምልክቶችን ይዘዋል ።ስለዚህ፣ በቲ.ጎንዲ ሲይዘው በአስተናጋጁ የሚአርአና መገለጫ ላይ የተደረጉ ለውጦችን ማጥናታችን በአስተናጋጁ እና በቲ ጎንዲዎች መካከል ያለውን ግንኙነት በግልፅ እንድንረዳ ይረዳናል።በእርግጥ, Thirugnanam et al.15 ቲ. ጎንዲ ከዕጢ እድገት ጋር በተያያዙ ልዩ አስተናጋጅ ሚአርኤዎች ላይ ያለውን አገላለጽ በመቀየር የአንጎል ካርሲኖጅንን እንደሚያበረታታ ጠቁሟል እና ቲ.
ይህ ጥናት የሚያተኩረው በ Toxoplasma BV2 በተያዙ አስተናጋጅ ማይክሮግሊያ ውስጥ exosomal miR-21 ለውጥ ላይ ነው።ከመጠን በላይ የተጨነቀ ሚአር-21 ኢላማ በሆነው በ FoxO1/p27 ኒውክሊየስ ውስጥ በመቆየቱ ምክንያት በ U87 glioma ሕዋሳት እድገት ውስጥ የተለወጠ exosomal miR-21 ሚና ተመልክተናል።
ከ BV2 የተገኘ ኤክሶሶም የተገኘው ልዩነት ሴንትሪፍግሽን በመጠቀም እና በተለያዩ ዘዴዎች የተረጋገጠው በሴሉላር ክፍሎች ወይም ሌሎች vesicles እንዳይበከል ነው።SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) ከ BV2 ሕዋሳት እና exosomes (ምስል 1A) በተወጡት ፕሮቲኖች መካከል ልዩ ዘይቤዎችን አሳይቷል (ምስል 1A) እና ናሙናዎች ለአሊክስ መኖር ተገምግመዋል፣ ይህም በምዕራቡ የ exosomal ፕሮቲን ጠቋሚዎች ተተነተነ።አሊክስ መሰየሚያ በኤክሶም ፕሮቲኖች ውስጥ ተገኝቷል ነገር ግን በ BV2 ሕዋስ lysate ፕሮቲኖች (ምስል 1 ለ) ውስጥ አልተገኘም.በተጨማሪም ከ BV2 ከሚገኘው ኤክሶሶም የተጣራ አር ኤን ኤ ባዮአናሊዘርን በመጠቀም ተተነተነ።18S እና 28S ribosomal subunits በ exosomal RNA ፍልሰት ንድፍ ውስጥ እምብዛም አይታዩም, ይህም አስተማማኝ ንጽሕናን ያሳያል (ምስል 1C).በመጨረሻም የኤሌክትሮን ስርጭት ማይክሮስኮፕ እንደሚያሳየው የታዩት ኤክሶሶሞች ከ60-150 nm መጠናቸው እና እንደ ኤክሶሶም ሞርፎሎጂ (ምስል 1D) የሚመስል ጽዋ መሰል መዋቅር እንዳላቸው ያሳያል።
ከ BV2 ሴሎች የተገኙ የኤክሶሶም ባህሪያት.(ሀ) የደህንነት መረጃ ሉህ ገጽ።ፕሮቲኖች ከ BV2 ሴሎች ወይም ከ BV2 የተገኙ ኤክሶሶሞች ተለይተዋል.የፕሮቲን ዘይቤዎች በሴሎች እና በ exosomes መካከል ይለያያሉ።(ለ) ስለ ኤክሶሶም ምልክት ማርክ (አሊክስ) የምዕራባውያን ነጠብጣብ ትንተና።(ሐ) ባዮአናሊዘርን በመጠቀም የተጣራ አር ኤን ኤ ከ BV2 ሕዋሳት እና BV2 የተገኙ ኤክሶሶም ግምገማ።ስለዚህ በ BV2 ሴሎች ውስጥ 18S እና 28S ribosomal subunits በ exosomal RNA ውስጥ እምብዛም አይገኙም።(D) ማስተላለፊያ ኤሌክትሮን ማይክሮስኮፕ እንደሚያሳየው ከ BV2 ሴሎች የተለዩ ኤክሶሶሞች በ 2% ዩራኒል አሲቴት አሉታዊ በሆነ መልኩ ተበክለዋል.Exosomes በመጠን ከ60-150 nm እና የጽዋ ቅርጽ አላቸው (ዘፈን እና ጁንግ፣ ያልታተመ መረጃ)።
ከBV2 የተገኙ ኤክሶሶሞች ወደ ዩ 87 የሰው ግሊኦማ ህዋሶች ሴሉላር ውስጠ-ህዋሳትን (confocal microscopy) በመጠቀም ተስተውለዋል።PKH26 ምልክት የተደረገባቸው exosomes በ U87 ሕዋሳት ሳይቶፕላዝም ውስጥ የተተረጎሙ ናቸው።ኒውክላይዎች በዲኤፒአይ ተበክለዋል (ምስል 2A) ይህ የሚያመለክተው BV2-የተገኙ exosomes በሴሎች ውስጥ ወደ ውስጥ ሊገቡ እና በተቀባዩ ሴሎች አካባቢ ላይ ተጽዕኖ ሊያሳድሩ እንደሚችሉ ነው።
ከ BV2 የተገኙ exosomes ወደ U87 glioma ሕዋሶች እና ከ BV2 የተገኙ exosomes በ Toxoplasma RH የተበከሉ የ U87 glioma ሕዋሳት እንዲባዙ አድርጓል።(ሀ) በU87 ሕዋሶች የተዋጡ ኤክሶሶሞች በኮንፎካል ማይክሮስኮፒ ይለካሉ።U87 glioma ሕዋሳት በPKH26 (ቀይ) ወይም ያለ ቁጥጥር ለ24 ሰአታት በተሰየሙ ኤክሶሶም ተክለዋል።ኒውክሊየሎቹ በDAPI (ሰማያዊ) ተበክለዋል እና ከዚያም በኮንፎካል ማይክሮስኮፕ (ሚዛን ባር: 10 μm, x 3000).(B) U87 glioma cell proliferation በሴሎች መስፋፋት ተወስኗል።U87 glioma ሕዋሳት ለተጠቀሰው ጊዜ በ exosomes ታክመዋል። *P <0.05 የተገኘው በተማሪው ፈተና ነው። *P <0.05 የተገኘው በተማሪው ፈተና ነው። * ፒ <0,05 получено по t-критерию Стьюдента. * ፒ <0.05 በተማሪ ቲ-ሙከራ። P <0.05 通过学生t 检验获得。 * ፒ <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 የተገኘው የተማሪውን ቲ-ፈተና በመጠቀም ነው።
ከ BV2 የተገኙ ኤክሶሶሞች ወደ U87 glioma ሕዋሳት መግባታቸውን ካረጋገጥን በኋላ፣ ከ BV2 የተገኘ Toxoplasma-derived exosomes በሰው ልጅ የጊሎማ ሴሎች እድገት ውስጥ ያለውን ሚና ለመመርመር የሕዋስ መስፋፋት ሙከራዎችን አደረግን።የ U87 ሕዋሳት ከ T. gondii-የተበከሉ BV2 ሕዋሳት exosomes ጋር ሕክምና T. gondii-የተበከሉ BV2-የመነጩ exosomes ቁጥጥር ጋር ሲነጻጸር ጉልህ የሆነ ከፍተኛ U87 ሕዋሳት መስፋፋት ምክንያት አሳይቷል (ምስል 2B).
በተጨማሪም የ U118 ሴሎች እድገት ልክ እንደ U87 ተመሳሳይ ውጤት ነበረው, ምክንያቱም Toxoplasma የሚያነቃቃ exosomes ከፍተኛውን የመራባት ደረጃ (መረጃ አይታይም).በነዚህ መረጃዎች ላይ በመመርኮዝ ከ BV2 የተገኘ Toxoplasma-infected exosomes በጊሎማ ሴል ስርጭት ውስጥ ትልቅ ሚና እንደሚጫወቱ ልንጠቁም እንችላለን።
Toxoplasma-infected BV2-derived exosomes በዕጢ እድገት ላይ ያለውን ተጽእኖ ለመመርመር U87 glioma ሕዋሳትን ለ xenograft ሞዴል እርቃናቸውን አይጥ ውስጥ በመርፌ ከ BV2-የተገኙ exosomes ወይም RH-infected BV2-derived exosomes.ዕጢዎች ከ 1 ሳምንት በኋላ ከታዩ በኋላ እያንዳንዱ የሙከራ ቡድን 5 አይጦች እንደ ዕጢው መጠን ተከፋፍለው ተመሳሳይ መነሻ ነጥብ ለማወቅ እና ዕጢው መጠን ለ 22 ቀናት ይለካል።
አይጥ ውስጥ U87 xenograft ሞዴል ጋር, ቀን 22 (ምስል 3A, B) ላይ BV2-የተገኘ RH-ተላላፊ exosome ቡድን ውስጥ ጉልህ ትልቅ ዕጢ መጠን እና ክብደት ተስተውሏል.በሌላ በኩል, ከ BV2-የተገኘ exosome ቡድን እና ከኤክሶሶም ህክምና በኋላ ባለው የቁጥጥር ቡድን መካከል ባለው የእጢ መጠን ላይ ከፍተኛ ልዩነት የለም.በተጨማሪም፣ በጊሎማ ሴሎች የተወጉ አይጦች እና ኤክሶሶሞች በአርኤች የተበከሉ BV2-የተገኙ exosomes ቡድን ውስጥ ትልቁን የዕጢ መጠን በእይታ አሳይተዋል (ምስል 3C)።እነዚህ ውጤቶች እንደሚያሳዩት BV2-የተገኘ Toxoplasma-የተበከሉ exosomes በመዳፊት ዕጢ ሞዴል ውስጥ የ glioma እድገትን ያመጣሉ.
በ U87 xenograft መዳፊት ሞዴል ውስጥ ከ BV2 የተገኙ ኤክሶሶሞች ኦንኮጄኔሲስ (AC)።በ BALB/c ራቁት አይጦች ከ BV2 በተገኙ በRH የተበከሉ ኤክሶሶም የታከሙ የዕጢ መጠን (A) እና ክብደት (ቢ) በከፍተኛ ሁኔታ ጨምረዋል።BALB/c ራቁት አይጥ (ሲ) ከቆዳ በታች ከ1 x 107 U87 ሴሎች ጋር በማትሪጀል ድብልቅ ውስጥ ታግዷል።መርፌ ከተከተቡ ከስድስት ቀናት በኋላ፣ 100 μg BV2-የተገኙ exosomes በአይጦች ውስጥ ታክመዋል።ዕጢው መጠን እና ክብደት የሚለካው በተጠቀሱት ቀናት እና ከመሥዋዕት በኋላ ነው. * ፒ <0.05. * ፒ <0.05. * Р < 0,05. * ፒ <0.05. ፒ <0.05 ፒ <0.05 * Р < 0,05. * ፒ <0.05.
መረጃው እንደሚያሳየው ከመከላከያ ወይም ከዕጢ እድገት ጋር የተያያዙ 37 ሚአርኤንኤዎች (16 ከመጠን በላይ የተጨመሩ እና 21 ዝቅ ያሉ) በ Toxoplasma RH strain (ምስል 4A) ከተያዙ በኋላ በማይክሮሊያ ውስጥ በከፍተኛ ሁኔታ ተለውጠዋል።ከተቀየሩ ሚአርኤዎች መካከል ያለው አንጻራዊ የ miR-21 አገላለጽ ደረጃዎች በእውነተኛ ጊዜ በRT-PCR ከ BV2 በተገኙ exosomes፣ በBV2 እና U87 ህዋሶች የታከሙ ኤክሶሶሞች ተረጋግጠዋል።የ miR-21 አገላለጽ በ Toxoplasma gondii (RH strain) የተበከሉ ከ BV2 ሴሎች ውስጥ ከፍተኛ መጠን ያለው ኤክሶሶም መጨመር አሳይቷል (ምስል 4B).በBV2 እና U87 ሴሎች ውስጥ ያለው የ miR-21 አንጻራዊ አገላለጽ መጠን የተቀየሩ ኤክሶሶም ከተወሰዱ በኋላ ጨምረዋል (ምስል 4B)።በእብጠት ታማሚዎች እና በToxoplasma gondii (ME49 strain) የተያዙ አይጦች የአንጎል ቲሹ ውስጥ ያለው አንጻራዊ የ miR-21 አገላለጽ ከቁጥጥር የበለጠ ነበር (ምስል 4C)።እነዚህ ውጤቶች በተገመቱት እና በተረጋገጡ የማይክሮ አር ኤን ኤዎች በብልቃጥ እና በብልቃጥ ደረጃዎች መካከል ካለው ልዩነት ጋር ይዛመዳሉ።
በ Toxoplasma gondii (RH) በተበከለ ማይክሮግሊያ ውስጥ በ exosomal miP-21a-5p አገላለጽ ላይ ለውጦች።(ሀ) ከቲ.ጎንዲ አርኤች ኢንፌክሽን በኋላ ከመከላከያ ወይም ከዕጢ እድገት ጋር በተዛመደ በሲአርኤን ላይ ከፍተኛ ለውጦችን ያሳያል።(ለ) አንጻራዊ የ miR-21 አገላለጽ ደረጃዎች በእውነተኛ ጊዜ በRT-PCR በBV2-የተገኙ ኤክሶሶሞች፣ BV2-ታከሙ exosomes እና U87 ሕዋሳት ተገኝተዋል።(ሐ) አንጻራዊ የ miR-21 አገላለጽ ደረጃዎች በእብጠት በሽተኞች (N=3) እና በToxoplasma gondii (ME49 strain) (N=3) በተያዙ አይጦች የአንጎል ቲሹዎች ውስጥ ተገኝተዋል። *P <0.05 የተገኘው በተማሪው ፈተና ነው። *P <0.05 የተገኘው በተማሪው ፈተና ነው። * P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 የተገኘው የተማሪውን ቲ-ፈተና በመጠቀም ነው። P <0.05 通过学生t 检验获得。 * ፒ <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 የተገኘው የተማሪውን ቲ-ፈተና በመጠቀም ነው።
ከ RH-የተበከሉ BV2 ሕዋሶች ኤክሶሶም በ Vivo እና in vitro ውስጥ የ gliomas እድገትን አስከትሏል (ምስል 2, 3).አግባብነት ያላቸውን ኤምአርኤን ለማወቅ፣ ከ BV2 ወይም RH BV2 በተገኙ በኤክሶሶም በተያዙ U87 ሴሎች ውስጥ የኤምአርኤን መጠን የፀረ-ጡመር ኢላማ ጂኖች፣ ፎርክ ሣጥን O1 (FoxO1)፣ PTEN እና ፕሮግራም የተደረገ የሕዋስ ሞት 4 (PDCD4) መርምረናል።የባዮኢንፎርማቲክስ ትንታኔ እንደሚያሳየው ፎክስኦ1፣ PTEN እና PDCD4 ጂኖችን ጨምሮ በርካታ ከዕጢ ጋር የተገናኙ ጂኖች miR-2121,22 ማያያዣ ጣቢያዎች አሏቸው።ከ BV2-የተገኙ exosomes (ምስል 5A) ጋር ሲነፃፀር የኤምአርኤን የፀረ-ቱሞር ኢላማ ጂኖች መጠን በ RH የተበከሉ BV2-የተገኙ exosomes ቀንሷል።FoxO1 ከ BV2-የተገኙ exosomes (ምስል 5B) ጋር ሲነፃፀር በ RH-የተበከሉ BV2-የተገኙ exosomes ውስጥ የፕሮቲን መጠን መቀነስ አሳይቷል።በእነዚህ ውጤቶች ላይ በመመርኮዝ ከ RH-የተበከሉ BV2 የሚመጡ ኤክሶሶሞች የፀረ-ኦንኮጅን ጂኖችን በመቆጣጠር በእጢ እድገት ውስጥ ሚናቸውን እንደሚጠብቁ ማረጋገጥ እንችላለን።
Toxoplasma RH-የተበከሉ BV2-የመነጩ exosomes በቶክሶፕላዝማ RH-የተበከሉ BV2-የመጡ exosomes በ U87 glioma ሕዋሳት ውስጥ ፀረ-tumor ጂኖች ለማፈን ያመጣሉ.(ሀ) የFoxO1፣ PTEN እና PDCD4 የእውነተኛ ጊዜ PCR አገላለጽ ከT.gondii RH-infected BV2 የተገኘ exosomes ከPBS exosomes ጋር ሲነጻጸር።β-actin mRNA እንደ መቆጣጠሪያ ጥቅም ላይ ውሏል.(ለ) FoxO1 አገላለጽ የሚወሰነው በምዕራባውያን መጥፋት ነው እና የዴንሲቶሜትሪ መረጃ በምስል ጄ ፕሮግራም በመጠቀም በስታቲስቲክስ ተገምግሟል። *P <0.05 የተገኘው በተማሪው ፈተና ነው። *P <0.05 የተገኘው በተማሪው ፈተና ነው። * P <0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 የተገኘው የተማሪውን ቲ-ፈተና በመጠቀም ነው። P <0.05 通过学生t 检验获得。 * ፒ <0.05 * P <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 የተገኘው የተማሪውን ቲ-ፈተና በመጠቀም ነው።
MiP-21 በ exosomes ውስጥ ከዕጢ ጋር በተገናኘ የጂን ቁጥጥር ላይ ያለውን ተጽእኖ ለመረዳት U87 ህዋሶች Lipofectamine 2000 ን በመጠቀም miP-21 inhibitor ተወስደዋል እና ሴሎቹ ከተተላለፉ ከ 24 ሰዓታት በኋላ ተሰብስበዋል ።በ miR-21 አጋቾቹ በሚተላለፉ ሴሎች ውስጥ የ FoxO1 እና p27 መግለጫ ደረጃዎች qRT-PCR (ምስል 6A,B) በመጠቀም ከ BV2-የተገኘ exosomes ከሚታከሙ ሴሎች ጋር ተነጻጽረዋል።የ miR-21 inhibitor ወደ U87 ሕዋሳት ማዛወር FoxO1 እና p27 አገላለጽ (FIG. 6) በከፍተኛ ሁኔታ ቀንሷል።
በአርኤች የተበከለው exosomal BV2-የተገኘ miP-21 ተቀይሯል FoxO1/p27 አገላለጽ በ U87 glioma ሕዋሳት ውስጥ።U87 ሕዋሳት Lipofectamine 2000 ን በመጠቀም በ miP-21 inhibitor ተላልፈዋል እና ሴሎች ከተተላለፉ ከ 24 ሰዓታት በኋላ ተሰብስበዋል ።በ miR-21 አጋቾቹ በሚተላለፉ ሴሎች ውስጥ የ FoxO1 እና p27 አገላለጽ ደረጃዎች qRT-PCR (A, B) በመጠቀም ከ BV2-የተገኘ exosomes ከሚታከሙ ሕዋሳት ጋር ተነጻጽረዋል።
የአስተናጋጁን በሽታ የመከላከል ምላሽ ለማምለጥ, የ Toxoplasma ተውሳክ ወደ ቲሹ ሳይስት ይቀየራል.በአስተናጋጁ የህይወት ዘመን ሁሉ አንጎል፣ ልብ እና የአጥንት ጡንቻን ጨምሮ የተለያዩ ሕብረ ሕዋሳትን ጥገኛ ያደርጋሉ እንዲሁም የአስተናጋጁን የመከላከያ ምላሽ ያስተካክላሉ።በተጨማሪም የሕዋሳትን ዑደት እና አፖፕቶሲስን መቆጣጠር ይችላሉ, እድገታቸውን ያስተዋውቁ14,24.ቶክሶፕላስማ ጎንዲ በአንጎል ማይክሮግሊያን ጨምሮ አስተናጋጁ የዴንድሪቲክ ሴሎችን፣ ኒውትሮፊልሎችን እና ሞኖሳይት/ማክሮፋጅ ዘርን በብዛት ይጎዳል።Toxoplasma gondii የ M2 phenotype መካከል macrophages ያለውን ልዩነት ያነሳሳቸዋል, pathogen ኢንፌክሽን በኋላ ቁስል ፈውስ ላይ ተጽዕኖ, እና ደግሞ hypervascularization እና granulomatous ፋይብሮሲስ ጋር የተያያዘ ነው.ይህ የ Toxoplasma ኢንፌክሽን ባህሪ ባህሪ ከዕጢ እድገት ጋር ከተያያዙ ጠቋሚዎች ጋር የተያያዘ ሊሆን ይችላል.በ Toxoplasma የሚቆጣጠረው የጥላቻ አካባቢ ከተዛማጁ ቅድመ ካንሰር ጋር ሊመሳሰል ይችላል።ስለዚህ, የ Toxoplasma ኢንፌክሽን ለአንጎል ዕጢዎች እድገት አስተዋጽኦ ማድረግ እንዳለበት መገመት ይቻላል.እንደ እውነቱ ከሆነ, ከፍተኛ መጠን ያለው የ Toxoplasma ኢንፌክሽን በተለያዩ የአንጎል ዕጢዎች ውስጥ በሚገኙ ታካሚዎች ውስጥ ተገልጿል.በተጨማሪም Toxoplasma gondii ሌላ ካርሲኖጅኒክ ውጤት ሊሆን ይችላል እና ሌሎች ተላላፊ ካርሲኖጂንስ የአንጎል ዕጢዎች እንዲዳብሩ ለመርዳት synergistically እርምጃ.በዚህ ረገድ, P. falciparum እና Epstein-Barr ቫይረስ በ synergistically Burkitt's lymphoma እንዲፈጠር አስተዋጽኦ ማድረጉ ጠቃሚ ነው.
በካንሰር ምርምር መስክ የኤክሶሶም ተቆጣጣሪዎች ሚና በሰፊው ተመርምሯል።ነገር ግን፣ በተህዋሲያን እና በተበከሉ አስተናጋጆች መካከል ያለው የ exosomes ሚና በደንብ አልተረዳም።እስካሁን ድረስ የተለያዩ ተቆጣጣሪዎች, ሚስጥራዊ ፕሮቲኖችን ጨምሮ, ፕሮቶዞአን ጥገኛ ተውሳኮች የአስተናጋጅ ጥቃትን የሚቋቋሙ እና ኢንፌክሽኑን የሚቀጥሉበት ባዮሎጂያዊ ሂደቶችን አብራርተዋል.በቅርብ ጊዜ ከፕሮቶዞአን ጋር የተገናኙ ማይክሮቬሴሎች እና ማይክሮ አር ኤን ኤዎቻቸው ከሴሎች ጋር በመገናኘት ለህልውናቸው ምቹ ሁኔታን ይፈጥራሉ የሚለው ጽንሰ ሃሳብ እያደገ መጥቷል።ስለዚህ፣ በተቀየሩ exosomal miRNAs እና glioma cell proliferation መካከል ያለውን ግንኙነት ለማወቅ ተጨማሪ ጥናቶች ያስፈልጋሉ።የማይክሮ አር ኤን ኤ ለውጥ (ክላስተር ጂኖች miR-30c-1፣ miR-125b-2፣ miR-23b-27b-24-1 እና miR-17-92) ከ STAT3 አራማጅ ጋር በtoxoplasma የተበከሉ የሰው ማክሮፋጅስ ውስጥ ይጣመራሉ፣ ቁጥጥር ይደረግበታል እና ጸረ-አልባነት ይፈጥራል። -አፖፕቶሲስ ለ Toxoplasma gondii ኢንፌክሽን ምላሽ 29 .የ Toxoplasma ኢንፌክሽን ከብዙ hyperproliferative በሽታዎች 30 ጋር የተያያዙትን የ miR-17-5p እና miR-106b-5p መግለጫን ይጨምራል.እነዚህ መረጃዎች እንደሚጠቁሙት በToxoplasma ኢንፌክሽን ቁጥጥር ስር ያሉ አስተናጋጆች ማይአርኤን ለፓራሳይት መትረፍ እና በባዮሎጂካል ባህሪ ውስጥ በሽታ አምጪ ተዋሲያን ጠቃሚ ሞለኪውሎች ናቸው።
የተለወጡ ሚአርኤንኤዎች አደገኛ ህዋሶች በሚፈጠሩበት እና በሚያድጉበት ጊዜ የተለያዩ የባህሪ አይነቶች ላይ ተጽእኖ ሊያሳድሩ ይችላሉ፡ እነዚህም gliomasን ጨምሮ፡ የእድገት ምልክቶች ራስን መቻል፣ እድገትን የሚከለክሉ ምልክቶችን አለመቻል፣ አፖፕቶሲስ መሸሽ፣ ያልተገደበ የመባዛት አቅም፣ angiogenesis፣ ወረራ እና ሜታስታሲስ እና እብጠት።በ glioma ውስጥ፣ የተለወጡ ሚአርኤንኤዎች በብዙ የአገላለጽ መገለጫ ጥናቶች ተለይተዋል።
አሁን ባለው ጥናት ውስጥ በቶክሶፕላስማ የተበከሉ ሆስት ሴሎች ውስጥ ከፍተኛ የ miRNA-21 መግለጫን አረጋግጠናል.miR-21 gliomas 33 ን ጨምሮ በጠንካራ እጢዎች ውስጥ በብዛት ከሚታዩ ማይክሮ አር ኤን ኤዎች አንዱ እንደሆነ ተለይቷል እና አገላለጹ ከ glioma ደረጃ ጋር ይዛመዳል።የተጠራቀሙ መረጃዎች እንደሚያሳዩት ሚአር-21 ለግሊኦማ እድገት እንደ ፀረ-አፖፖቲክ ምክንያት ሆኖ የሚያገለግል እና በሰው ልጅ የአንጎል አደገኛ በሽታዎች ሕብረ ሕዋሳት እና ፕላዝማ ውስጥ በጣም የተጋነነ ልብ ወለድ ኦንኮጂን ነው።የሚገርመው፣ ሚአር-21 በጊሎማ ህዋሶች እና ቲሹዎች ውስጥ አለመንቀሳቀስ በካሴፕስ-ጥገኛ አፖፕቶሲስ ምክንያት የሕዋስ መስፋፋትን መከልከልን ያስከትላል።የ miR-21 የተገመቱ ዒላማዎች ባዮኢንፎርማቲክ ትንታኔ ከአፖፕቶሲስ ጎዳናዎች ጋር የተቆራኙ በርካታ ዕጢ ማፈኛ ጂኖችን አሳይቷል፣ እነዚህም በፕሮግራም የተደረገ የሕዋስ ሞት 4 (PDCD4)፣ ትሮፖምዮሲን (TPM1)፣ PTEN፣ እና ፎርክሄድ ሳጥን O1 (FoxO1)፣ ከ miR-2121 ማሰሪያ ጣቢያ ጋር።.22.38.
ፎክስኦ1፣ እንደ አንዱ የጽሑፍ ግልባጭ (ፎክስኦ)፣ በተለያዩ የሰዎች ካንሰር ዓይነቶች እድገት ውስጥ የተሳተፈ ሲሆን እንደ p21፣ p27፣ Bim እና FasL40 ያሉ ​​የዕጢ ማፈንያ ጂኖችን አገላለጽ መቆጣጠር ይችላል።ፎክስኦ1 የሕዋስ እድገትን ለመግታት እንደ p27 ያሉ የሕዋስ ዑደት አጋቾቹን ማሰር እና ማግበር ይችላል።ከዚህም በላይ ፎክስኦ1 የ PI3K/Akt ምልክት ማድረጊያ ቁልፍ ውጤት ሲሆን እንደ የሕዋስ ዑደት እድገት እና የሕዋስ ልዩነት ያሉ ብዙ ባዮሎጂያዊ ሂደቶችን በ p2742 ግልባጭ በማግበር ይቆጣጠራል።
በማጠቃለያው ከ Toxoplasma-infected microglia የተገኘ exosomal miR-21 እንደ የጊሎማ ሴሎች እድገት መቆጣጠሪያ ጠቃሚ ሚና ይጫወታል ብለን እናምናለን (ምስል 7)።ነገር ግን፣ በ exosomal miR-21፣ በተለወጠው የቶክሶፕላስማ ኢንፌክሽን እና በግሊማ እድገት መካከል ቀጥተኛ ግንኙነት ለማግኘት ተጨማሪ ጥናቶች ያስፈልጋሉ።እነዚህ ውጤቶች በ Toxoplasma ኢንፌክሽን እና በ glioma መከሰት መካከል ያለውን ግንኙነት ለማጥናት መነሻ ነጥብ ይሰጣሉ ተብሎ ይጠበቃል።
በዚህ ጥናት ውስጥ የ glioma (የአንጎል) ካርሲኖጅጄኔሲስ ዘዴ ንድፍ ንድፍ ቀርቧል.ደራሲው በፓወር ፖይንት 2019 (ማይክሮሶፍት፣ ሬድመንድ፣ ዋ) ላይ ይስላል።
በዚህ ጥናት ውስጥ ያሉ ሁሉም የሙከራ ፕሮቶኮሎች የእንስሳትን አጠቃቀምን ጨምሮ በሴኡል ብሔራዊ ዩኒቨርሲቲ የእንስሳት እንክብካቤ እና የተጠቃሚ ኮሚቴ መደበኛ የሥነ-ምግባር መመሪያዎች እና በሴኡል ብሔራዊ ዩኒቨርሲቲ የሕክምና ትምህርት ቤት ተቋማዊ ግምገማ ቦርድ ጸድቀዋል (IRB ቁጥር SNU- 150715)።-2)።ሁሉም የሙከራ ሂደቶች የተከናወኑት በ ARRIVE ምክሮች መሰረት ነው.
BV2 mouse microglia እና U87 human glioma cells በዱልቤኮ የተቀየረ የንስር መካከለኛ (DMEM፣ Welgene፣ Seoul፣ Korea) እና Roswell Park Memorial Institute's Medium (RPMI; Welgene)፣ በቅደም ተከተል እያንዳንዳቸው 10% የፅንስ bovine serum፣ 4 mM l- ግሉታሚን, 0.2 ሚሜ ፔኒሲሊን እና 0.05 ሚሜ ስቴፕቶማይሲን.ሴሎች በ 5% CO2 በ 37 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ በማቀፊያ ውስጥ ተሠርተዋል.ሌላ የጊሎማ ሴል መስመር U118 ከ U87 ሴሎች ጋር ለማነፃፀር ጥቅም ላይ ውሏል።
ኤክሶዞሞችን ከ T. gondii-የተበከሉ RH እና ME49 ዝርያዎች ለመለየት T.gondii tachyzoites (RH strain) ከ 3-4 ቀናት በፊት በመርፌ ከ6-ሳምንት BALB/c አይጦች የሆድ ክፍል ውስጥ ተሰብስቧል።Tachyzoites በፒቢኤስ ሶስት ጊዜ ታጥበው በሴንትሪፍግሽን በ 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 43.ውጥረት ME49 tachyzoites ለማግኘት, BALB/c አይጦች ወደ 20 ቲሹ cysts ጋር intraperitoneal በመርፌ እና የቋጠሩ ውስጥ tachyzoite ትራንስፎርሜሽን የተሰበሰበው ከ6-8ኛው ቀን ኢንፌክሽን (PI) ላይ የሆድ ዕቃን በማጠብ ነው.በፒቢኤስ የተያዙ አይጦች።ME49 tachyzoites በ 100 μg/ml ፔኒሲሊን (ጊብኮ/BRL፣ ግራንድ ደሴት፣ NY፣ ዩኤስኤ)፣ 100 μg/ml ስትሬፕቶማይሲን (ጊብኮ/BRL) እና 5% የፅንስ ቦቪን ሴረም (ሎንዛ፣ ዎከርስቪል፣ ኤምዲ) በተጨመሩ ሴሎች ውስጥ ይበቅላሉ። .., ዩኤስኤ) በ 37 ° ሴ እና 5% ካርቦን ዳይኦክሳይድ.በቬሮ ሴሎች ውስጥ ከተመረተ በኋላ ME49 tachyzoites ሁለት ጊዜ በ 25 መለኪያ መርፌ እና ከዚያም በ 5 μm ማጣሪያ አማካኝነት ፍርስራሾችን እና ሴሎችን ለማስወገድ ተወስደዋል.ከታጠበ በኋላ, tachyzoites በ PBS44 ውስጥ እንደገና ታግደዋል.የ Toxoplasma gondii strain ME49 የሕብረ ሕዋስ ኪስታዎች የተያዙት ከተበከሉ C57BL/6 አይጦች አንጎል (የምስራቃዊ ባዮ የእንስሳት ማእከል፣ ሴኦንግናም፣ ኮሪያ) ውስጥ በተሰነጠቀ ውስጠ-ፔሪቶናል መርፌ ነው።በME49 የተጠቁ አይጦች አእምሮ ከ3 ወራት PI በኋላ ተሰብስቦ በአጉሊ መነጽር የተፈጨ ሲሆን የቋጠሩን ቋጥኝ ለመለየት ነው።የተበከሉት አይጦች በሴኡል ብሔራዊ ዩኒቨርሲቲ የሕክምና ትምህርት ቤት በልዩ በሽታ አምጪ-ነጻ ሁኔታዎች (SPF) ተጠብቀዋል።
አጠቃላይ አር ኤን ኤ ከBV2-የተገኙ exosomes፣BV2 ሴሎች እና ቲሹዎች ሚአርNeasy ሚኒ ኪት (Qiagen፣ Hilden፣ Germany)ን በመጠቀም በአምራቹ መመሪያ መሰረት፣ የማብራሪያ ደረጃውን የመታቀፉን ጊዜ ጨምሮ።የአር ኤን ኤ ትኩረት በ NanoDrop 2000 spectrophotometer ላይ ተወስኗል።የአር ኤን ኤ ማይክሮአራይ ጥራት የተገመገመው Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, the Netherlands) በመጠቀም ነው።
ዲኤምኤም ከ10% exosome-ድሃ ኤፍቢኤስ ጋር በ ultracentrifugation በ 100,000g ለ 16 ሰአታት በ 4°C ተዘጋጅቶ በ0.22 μm ማጣሪያ (Nalgene, Rochester, NY, USA) ተጣርቶ ነበር።BV2 ሴሎች፣ 5 × 105፣ በዲኤምኤም ውስጥ 10% exosome-depleted FBS እና 1% አንቲባዮቲክስ በ37°C እና 5% CO2 የያዙ ናቸው።ከ 24 ሰአታት በኋላ, tachyzoites of strain RH ወይም ME49 (MOI = 10) ወደ ሴሎች ተጨምረዋል እና ወራሪ ያልሆኑ ጥገኛ ተህዋሲያን በአንድ ሰአት ውስጥ ተወግደው በዲኤምኤም ተሞልተዋል.ከ BV2 ሴሎች የሚመጡ ኤክሶሶሞች በተሻሻለው ልዩነት ሴንትሪፍግሽን ተለይተዋል፣ በብዛት ጥቅም ላይ የዋለው ዘዴ።ለአር ኤን ኤ ወይም ፕሮቲን ትንተና በ 300 μl PBS ውስጥ exosome pelletን እንደገና ያቁሙ።የገለልተኛ ኤክሶሶም ክምችት የሚወሰነው BCA ፕሮቲን መመርመሪያ ኪት (ፒርስ፣ ሮክፎርድ፣ IL፣ USA) እና ናኖድሮፕ 2000 ስፔክሮፎቶሜትር በመጠቀም ነው።
ከBV2 ህዋሶች ወይም ከBV2 የተገኙ ኤክሶሶሞች በ PRO-PREP™ ፕሮቲን ማውጣት መፍትሄ (ኢንትሮን ባዮቴክኖሎጂ፣ ሴኦንግናም፣ ኮሪያ) እና ፕሮቲኖች በኮማሴ ብሩህ ሰማያዊ በ10% ኤስዲኤስ ፖሊacrylamide gels ላይ ተጭነዋል።በተጨማሪም ፕሮቲኖች ለ 2 ሰአታት ወደ PVDF ሽፋኖች ተላልፈዋል.የምዕራባውያን ብልቶች የተረጋገጠው የ Alix antibody (ሴል ሲግናልንግ ቴክኖሎጂ፣ ቤቨርሊ፣ ኤምኤ፣ ዩኤስኤ) እንደ ኤክሶሶም ምልክት በመጠቀም ነው።ኤችአርፒ-የተጣመረ ፍየል ፀረ-አይጥ IgG (H + L) (ቤቴል ላቦራቶሪዎች፣ ሞንትጎመሪ፣ ቲኤክስ፣ ዩኤስኤ) እና LAS-1000 እና የላይሚንሰንት ምስል ተንታኝ (ፉጂ ፎቶግራፊክ ፊልም፣ ቶኪዮ፣ ጃፓን) እንደ ሁለተኛ ደረጃ ፀረ እንግዳ አካላት ጥቅም ላይ ውለዋል።.የማስተላለፍ ኤሌክትሮን ማይክሮስኮፕ የተከናወነው የኤክሶሶም መጠን እና ቅርፅን ለማጥናት ነው.ከ BV2 ህዋሶች (6.40 μg/µl) የተነጠሉ ኤክሶሶሞች በካርቦን በተሸፈነው ጥልፍልፍ ላይ ተዘጋጅተው ለ1 ደቂቃ በ2% ዩራኒል አሲቴት አሉታዊ በሆነ መልኩ ተበክለዋል።የተዘጋጁት ናሙናዎች በ ES1000W Erlangshen CCD ካሜራ (Gatan, Pleasanton, CA, USA) የተገጠመውን JEOL 1200-EX II (ቶኪዮ, ጃፓን) በመጠቀም በ 80 ኪሎ ቮልት ፈጣን ቮልቴጅ ታይተዋል.
BV2-የተገኙ exosomes PKH26 Red Fluorescent Linker Kit (ሲግማ-አልድሪች, ሴንት. ሉዊስ, MO, ዩኤስኤ) በክፍል ሙቀት ውስጥ ለ 15 ደቂቃዎች በመጠቀም ተበክሏል.U87 ሕዋሳት, 2 × 105, PKH26-የተሰየመ exosomes (ቀይ) ጋር ወይም ምንም exosomes እንደ አሉታዊ ቁጥጥር, 37 ° ሴ ላይ 24 ሰዓታት ውስጥ 5% CO2 incubator ውስጥ ገብተዋል.የ U87 ሴል ኒዩክሊየሎች በ DAPI (ሰማያዊ) ተበክለዋል, U87 ሴሎች በ 4% paraformaldehyde ውስጥ ለ 15 ደቂቃዎች በ 4 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ተስተካክለዋል እና ከዚያም በሊይካ TCS SP8 STED CW ኮንፎካል ማይክሮስኮፕ ሲስተም (Leica Microsystems, Mannheim, Germany) ውስጥ ተንትነዋል.የሚታይ.
ሲዲኤንኤ ከሲአርኤን የተሰራው Mir-X siRNA የመጀመሪያ ስትራንድ ውህድ እና SYBR qRT-PCR ኪት (ታካራ ባዮ ኢንክ. ሺጋ፣ ጃፓን) በመጠቀም ነው።የእውነተኛ ጊዜ መጠናዊ PCR የተከናወነው iQ5 የእውነተኛ ጊዜ PCR ማወቂያ ስርዓትን (ባዮ-ራድ፣ ሄርኩለስ፣ ሲኤ፣ ዩኤስኤ) በመጠቀም ፕሪመርሮችን እና አብነቶችን ከSYBR Premix ጋር በመጠቀም ነው።ዲ ኤን ኤ ለ 40 ዑደቶች denaturation በ 95 ° ሴ ለ 15 ሴኮንድ እና በ 60 ° ሴ ለ 60 ሰከንድ.ከእያንዳንዱ PCR ምላሽ የተገኘው መረጃ የተተነተነው የ iQ™5 ኦፕቲካል ሲስተም ሶፍትዌር (ባዮ-ራድ) የመረጃ ትንተና ሞጁል በመጠቀም ነው።በተመረጡ የዒላማ ጂኖች እና β-actin/siRNA (እና U6) መካከል ያለው የጂን አገላለጽ አንጻራዊ ለውጦች መደበኛውን የከርቭ ዘዴ በመጠቀም ይሰላሉ።ጥቅም ላይ የዋሉ የፕሪመር ቅደም ተከተሎች በሰንጠረዥ 1 ውስጥ ይታያሉ.
3 x 104 U87 glioma ሕዋሶች በ96-ጉድጓድ ሳህኖች ውስጥ ተዘርተው በ Toxoplasma ከተያዙ ኤክሶሶም ጋር ተቀላቅለዋል ከ BV2 (50 μg/ml) ወይም ከ BV2 (50 μg/ml) የተገኘ የ 12፣ 18 እና 36 መቆጣጠሪያ። .የሕዋስ መስፋፋት መጠን የሚወሰነው የሕዋስ ቆጠራ ኪት-8 (ዶጂንዶ, ኩማሞቶ, ጃፓን) (ተጨማሪ ምስሎች S1-S3) 46 በመጠቀም ነው.
የ5-ሳምንት ሴት BALB/c ራቁት አይጥ ከኦሪየንት ባዮ (ሴኦንግናም-ሲ፣ ደቡብ ኮሪያ) የተገዙ እና በክፍል የሙቀት መጠን (22±2°C) እና እርጥበት (45±15°ሴ) በተከለከሉ ቤቶች ውስጥ ለየብቻ ተቀምጠዋል።%) በክፍል ሙቀት (22 ± 2 ° ሴ) እና እርጥበት (45 ± 15%).የ12 ሰአት የብርሃን ዑደት እና የ12 ሰአት የጨለማ ዑደት በ SPF (ሴኡል ናሽናል ዩኒቨርሲቲ የህክምና የእንስሳት ማዕከል) ስር ተከናውኗል።አይጦች በዘፈቀደ በሦስት ቡድን እያንዳንዳቸው 5 አይጦች ተከፍለዋል እና ሁሉም ቡድኖች 1 x 107 U87 glioma ሕዋሳት በያዙ 400 ሚሊ PBS እና እድገት ምክንያት BD Matrigel™ (BD Science, Miami, FL, USA) ጋር subcutaneous በመርፌ.ዕጢው ከተከተበ ከስድስት ቀናት በኋላ ከ BV2 ሴሎች (ከ Toxoplasma ኢንፌክሽን ጋር / ከሌለ) 200 ሚሊ ግራም exosomes ወደ ዕጢው ቦታ ገብቷል ።እብጠቱ ከተበከለ ከ22 ቀናት በኋላ በእያንዳንዱ ቡድን ውስጥ ያሉት የአይጦች እጢ መጠን በሳምንት ሦስት ጊዜ በካሊፐር ይለካል እና የእጢው መጠን በቀመር 0.5 × (ስፋት) × 2 × ርዝመት ይሰላል።
የማይክሮ አር ኤን ኤ አገላለጽ ትንተና miRCURYTM LNA ሚአርኤንኤ አደራደርን በመጠቀም፣ 7ኛ ትውልድ ያለው mmu እና rno ድርድሮች (EXIQON፣ Vedbaek፣ Denmark) በ3100 ሰው፣ አይጥ እና አይጥ ሚአርኤን የሚይዙ 1119 በደንብ የሚታወቁ አይጦችን ይሸፍናል።በዚህ ሂደት ውስጥ ከ 250 እስከ 1000 ng አጠቃላይ አር ኤን ኤ ከ5′-ፎስፌት ተወግዷል በጥጃ አንጀት አልካላይን ፎስፌትስ ህክምና በመቀጠል በ Hy3 አረንጓዴ ፍሎረሰንት ቀለም።የተለጠፉት ናሙናዎች ድቅልቅያ ክፍል ኪት (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) እና የማዳቀል ስላይድ ኪት (Agilent Technologies) በመጠቀም የማይክሮ አራራይ ስላይዶችን በመጫን ተዳቅለዋል።ማዳቀል ለ 16 ሰአታት በ 56 ዲግሪ ሴንቲ ግሬድ ውስጥ ተካሂዷል, ከዚያም ማይክሮአራሪዎች በአምራቹ ምክሮች መሰረት ታጥበዋል.የተቀነባበሩት ማይክሮ አራራይ ስላይዶች በAgilent G2565CA ማይክሮ አራራይ ስካነር ሲስተም (Agilent Technologies) በመጠቀም ተቃኝተዋል።የተቃኙ ምስሎች Agilent Feature Extraction ሶፍትዌር ሥሪት 10.7.3.1 (Agilent Technologies) በመጠቀም ወደ ሀገር ውስጥ ገብተዋል እና የእያንዳንዱ ምስል የፍሎረሰንት መጠን በተሻሻለው የኤክሳይኮን ፕሮቶኮል ተዛማጅ የGAL ፋይል ተቆጥሯል።ለአሁኑ ጥናት የማይክሮአረይ መረጃ በጂኦ ዳታቤዝ ውስጥ ተቀምጧል የመግቢያ ቁጥር GPL32397።
በToxoplasma የተጠቁ የበሰሉ exosomal miRNAs በማይክሮግሊያ የ RH ወይም ME49 ዝርያዎች መግለጫዎች የተለያዩ የኔትወርክ መሳሪያዎችን በመጠቀም ተንትነዋል።ከዕጢ እድገት ጋር የተያያዙ ሚአርኤንኤዎች miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) በመጠቀም ተለይተዋል እና ከተለመደው የሲግናል ጥንካሬ (log2) ከ8.0 በላይ ተጣርተዋል።ከሚአርኤንኤዎች መካከል፣ በተለየ ሁኔታ የተገለጹ ሚአርኤዎች ከ1.5 እጥፍ በላይ ተለውጠዋል በ RH ወይም ME49 ዝርያዎች በቲ.
ሴሎች በ Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) በመጠቀም በኦፕቲ-ኤምኤም (ጊብኮ, ካርልስባድ, ካሊፎርኒያ, ዩኤስኤ) ውስጥ በስድስት-ጉድጓድ ሳህኖች (3 x 105 ሕዋሳት / ጉድጓድ) ውስጥ ተዘርተዋል.የተለወጡት ህዋሶች ለ 6 ሰአታት ተሠርተው ነበር ከዚያም መካከለኛው ወደ አዲስ የተሟላ መካከለኛ ተቀይሯል.ሴሎች ከተተላለፉ ከ 24 ሰዓታት በኋላ ተሰብስበዋል.
ስታቲስቲካዊ ትንታኔ በዋናነት የተማሪውን ቲ-ሙከራን ከኤክሴል ሶፍትዌር (ማይክሮሶፍት፣ ዋሽንግተን ዲሲ፣ አሜሪካ) በመጠቀም ነው።ለሙከራ የእንስሳት ትንተና፣ ባለ ሁለት መንገድ ANOVA ፕሪዝም 3.0 ሶፍትዌር (ግራፍፓድ ሶፍትዌር፣ ላ ጆላ፣ ሲኤ፣ አሜሪካ) በመጠቀም ተካሂዷል። P-እሴቶች <0.05 እንደ ስታቲስቲካዊ ጠቀሜታ ተቆጥረዋል። P-እሴቶች<0.05 እንደ ስታቲስቲካዊ ጠቀሜታ ተቆጥረዋል። Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P እሴቶች <0.05 በስታቲስቲካዊ ጠቀሜታ ተደርገው ይወሰዳሉ። P 值< 0.05 被认为具有统计学意义。 ፒ <0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. P እሴቶች <0.05 በስታቲስቲካዊ ጠቀሜታ ተደርገው ይወሰዳሉ።
በዚህ ጥናት ውስጥ ጥቅም ላይ የዋሉ ሁሉም የሙከራ ፕሮቶኮሎች በሴኡል ብሔራዊ ዩኒቨርሲቲ የሕክምና ትምህርት ቤት ተቋማዊ ግምገማ ቦርድ ጸድቀዋል (IRB ቁጥር SNU-150715-2)።
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
ፉርሊ, ጄ እና ሌሎች.እ.ኤ.አ. በ 2018 የተገመተው የአለም አቀፍ የካንሰር ክስተት እና ሞት፡ GLOBOCAN ምንጮች እና ዘዴዎች።ትርጓሜ።ጄ. ራክ 144፣ 1941–1953 (2019)።
ራሺድ፣ ኤስ.፣ ሬህማን፣ ኬ. እና አካሽ፣ ኤምኤስ የአንጎል ዕጢዎች አደገኛ ሁኔታዎች እና የእነርሱ የሕክምና ጣልቃገብነት ግንዛቤ። ራሺድ፣ ኤስ.፣ ሬህማን፣ ኬ. እና አካሽ፣ ኤምኤስ የአንጎል ዕጢዎች አደገኛ ሁኔታዎች እና የእነርሱ የሕክምና ጣልቃገብነት ግንዛቤ።Rashid, S., Rehman, K. እና Akash, MS የአንጎል ዕጢዎች እና ዋና ዋና የሕክምና ጣልቃገብነት አደጋዎች ግምገማ. ራሺድ፣ ኤስ.፣ ረህማን፣ ኬ. እና አካሽ፣ MS 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施。 ራሺድ፣ ኤስ.፣ ሬህማን፣ ኬ. እና አካሽ፣ ኤምኤስ ስለ የአንጎል ዕጢ አደገኛ ሁኔታዎች እና የሕክምና ጣልቃገብነቶች ጥልቅ ግንዛቤ።Rashid, S., Rehman, K. እና Akash, MS የአንጎል ዕጢዎች እና ዋና ዋና የሕክምና ጣልቃገብነት አደጋዎች ግምገማ.ባዮሜዲካል ሳይንስ.ፋርማሲስት.143, 112119 (2021)
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. በሰው ኦሮዲጅስቲቭ እና በሴት ብልት ትራክት ነቀርሳዎች ውስጥ የባክቴሪያ-ቫይረስ መስተጋብር-የኤፒዲሚዮሎጂ እና የላብራቶሪ ማስረጃዎች ማጠቃለያ. Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. በሰው ኦሮዲጅስቲቭ እና በሴት ብልት ትራክት ነቀርሳዎች ውስጥ የባክቴሪያ-ቫይረስ መስተጋብር-የኤፒዲሚዮሎጂ እና የላብራቶሪ ማስረጃዎች ማጠቃለያ.Kato I., Zhang J. እና Sun J. በሰው ልጅ የጨጓራና ትራክት እና በሴት ብልት ውስጥ በካንሰር ውስጥ የባክቴሪያ-ቫይረስ ግንኙነቶች-የኤፒዲሚዮሎጂ እና የላብራቶሪ መረጃ ማጠቃለያ. ካቶ፣ I.፣ Zhang፣ J. & Sun፣ ጄ总结 Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. በሰው የአፍ ውስጥ ምሰሶ መፈጨት እና የሴት የመራቢያ ትራክት ውስጥ የባክቴሪያ-ቫይረስ መስተጋብር-የታዋቂ በሽታ ሳይንስ እና የላብራቶሪ ማስረጃዎች ማጠቃለያ።Kato I., Zhang J. እና Sun J. በሰው ልጅ የጨጓራና ትራክት ነቀርሳ እና በሴት ብልት ካንሰር ውስጥ የባክቴሪያ-ቫይረስ ግንኙነቶች-የኤፒዲሚዮሎጂ እና የላብራቶሪ መረጃ ማጠቃለያ.ካንሰር 14, 425 (2022).
Magon, KL & Parish, JL ከኢንፌክሽን ወደ ካንሰር፡ የዲኤንኤ እጢ ቫይረሶች የሴል ማእከላዊ ካርቦን እና የሊፕድ ሜታቦሊዝምን እንዴት እንደሚቀይሩ. Magon, KL & Parish, JL ከኢንፌክሽን ወደ ካንሰር፡ የዲኤንኤ እጢ ቫይረሶች የሴል ማእከላዊ ካርቦን እና የሊፕድ ሜታቦሊዝምን እንዴት እንደሚቀይሩ.Mahon, KL እና Parish, JL የእሳት ቃጠሎ ወደ ካንሰር: በዲኤንኤ ላይ የተመሰረቱ እጢ ቫይረሶች የሴል ማእከላዊ ካርቦን እና የሊፕድ ሜታቦሊዝምን እንዴት እንደሚቀይሩ. ማጎን፣ ኬኤል እና ፓሪሽ፣ ጄኤል 从感染到癌症：ዲ ኤን ኤ Magon, KL & Parish, JL ከኢንፌክሽን ወደ ካንሰር፡ የዲኤንኤ እጢ ቫይረሶች የሴል ማእከላዊ ካርቦን እና የሊፕድ ሜታቦሊዝምን እንዴት እንደሚቀይሩ.Mahon, KL እና Parish, JL ወደ ካንሰር መበከልን ያቃጥላል፡ የዲኤንኤ እጢ ቫይረሶች በሴሎች ውስጥ ማዕከላዊ ካርቦን እና የሊፕዲድ ልውውጥን እንዴት እንደሚቀይሩ.ክፍት ባዮሎጂ.11, 210004 (2021).
Correia da Costa, JM et al.ካቴኮል ኢስትሮጅንስ የሺስቶሶም እና የጉበት ፍሉክስ እና ከሄልሚንት ጋር የተያያዘ ካንሰር.ፊት ለፊት.ትኩስ ከውስጥ.5, 444 (2014)