Nature.comን ስለጎበኙ እናመሰግናለን።እየተጠቀሙበት ያለው የአሳሽ ስሪት የተወሰነ የሲኤስኤስ ድጋፍ አለው።ለበለጠ ልምድ፣ የዘመነ አሳሽ እንድትጠቀም እንመክርሃለን (ወይም የተኳኋኝነት ሁነታን በኢንተርኔት ኤክስፕሎረር አሰናክል)።እስከዚያው ድረስ ቀጣይ ድጋፍን ለማረጋገጥ ጣቢያውን ያለ ቅጦች እና ጃቫስክሪፕት እናቀርባለን።
ለሳንባ ሲስቲክ ፋይብሮሲስ ሕክምና የሚውሉ የጂን ቬክተሮች ወደ ኮንዳክቲቭ አየር መንገዱ ማነጣጠር አለባቸው ምክንያቱም የሳንባዎች ሽግግር ምንም ዓይነት የሕክምና ውጤት ስለሌለው.የቫይረስ ትራንስፎርሜሽን ውጤታማነት በቀጥታ ከአጓጓዥው የመኖሪያ ጊዜ ጋር የተያያዘ ነው.ነገር ግን እንደ ጂን ተሸካሚዎች ያሉ የመላኪያ ፈሳሾች ወደ ውስጥ በሚተነፍሱበት ጊዜ በተፈጥሮ ወደ አልቪዮሊዎች ይሰራጫሉ, እና የማንኛውም ቅርጽ ቴራፒዩቲክ ቅንጣቶች በ mucociliary መጓጓዣ በፍጥነት ይወገዳሉ.በመተንፈሻ አካላት ውስጥ የጂን ተሸካሚዎችን የመኖሪያ ጊዜ ማራዘም አስፈላጊ ነው ነገር ግን ለመድረስ አስቸጋሪ ነው.ወደ መተንፈሻ ቱቦው ወለል ላይ ሊመሩ የሚችሉ ተሸካሚ-የተጣመሩ መግነጢሳዊ ቅንጣቶች የክልል ኢላማን ማሻሻል ይችላሉ።በ Vivo ኢሜጂንግ ላይ ባሉ ችግሮች ምክንያት በአየር መንገዱ ላይ እንደዚህ ያሉ ትናንሽ መግነጢሳዊ ቅንጣቶች በተተገበረ መግነጢሳዊ መስክ ውስጥ ባህሪያቸው በደንብ አልተረዳም።የዚህ ጥናት አላማ የሲንክሮሮን ኢሜጂንግን በመጠቀም በ Vivo ውስጥ የነጠላ እና የጅምላ ቅንጣቶችን ተለዋዋጭነት እና ባህሪን ለማጥናት በተከታታይ ማግኔቲክ ቅንጣቶች በተዳከሙ አይጦች ቧንቧ ውስጥ የሚያደርጉትን እንቅስቃሴ በምስል ለማሳየት ነበር።ከዚያም በተጨማሪ መግነጢሳዊ መስክ በሚኖርበት ጊዜ የሌንስ ቫይረስ መግነጢሳዊ ቅንጣቶችን ማድረስ በአይጥ መተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ያለውን የመተላለፊያ ቅልጥፍናን ይጨምር እንደሆነ ገምግመናል።ሲንክሮትሮሮን ኤክስ ሬይ ምስል በማይንቀሳቀሱ እና በሚንቀሳቀሱ መግነጢሳዊ መስኮች በብልቃጥ እና በቪኦ ውስጥ የመግነጢሳዊ ቅንጣቶችን ባህሪ ያሳያል።ቅንጣቶች ማግኔቶችን በመጠቀም በአየር መንገዱ ላይ በቀላሉ መጎተት አይችሉም, ነገር ግን በማጓጓዝ ጊዜ, ክምችቶች በእይታ መስክ ላይ ያተኩራሉ, መግነጢሳዊ መስክ በጣም ጠንካራ በሆነበት.የሌንቲቫይራል መግነጢሳዊ ቅንጣቶች መግነጢሳዊ መስክ በሚኖሩበት ጊዜ የማስተላለፊያ ቅልጥፍና በስድስት እጥፍ ጨምሯል.እነዚህ ውጤቶች አንድ ላይ ሲደመር የሌንቲቫይራል ማግኔቲክ ቅንጣቶች እና ማግኔቲክ ሜዳዎች በ Vivo ውስጥ ባሉ የአየር መተላለፊያ መንገዶች ውስጥ የጂን ቬክተር ኢላማ እና የመተላለፊያ ደረጃዎችን ለማሻሻል ጠቃሚ አቀራረቦች ሊሆኑ እንደሚችሉ ይጠቁማሉ።
ሳይስቲክ ፋይብሮሲስ (CF) የሚከሰተው CF ትራንስሜምብራን ኮንዳክሽን ተቆጣጣሪ (CFTR) በሚባል ነጠላ ጂን ውስጥ ባሉ ልዩነቶች ምክንያት ነው።የ CFTR ፕሮቲን በሳይስቲክ ፋይብሮሲስ በሽታ አምጪ ተህዋስያን ውስጥ ዋና ቦታ የሆነውን የአየር መተላለፊያ መንገዶችን ጨምሮ በሰውነት ውስጥ ባሉ ብዙ ኤፒተልየል ሴሎች ውስጥ የሚገኝ ion ቻናል ነው።የ CFTR ጉድለቶች ወደ ያልተለመደ የውሃ ማጓጓዝ፣ የአየር መንገዱ ወለል ድርቀት እና የአየር መተላለፊያ ወለል ፈሳሽ ንብርብር (ASL) ጥልቀት መቀነስ ያስከትላል።በተጨማሪም የ mucociliary ትራንስፖርት (ኤም.ቲ.ቲ.) ስርዓት የመተንፈሻ ቱቦዎችን ወደ ውስጥ ከሚተነፍሱ ቅንጣቶች እና በሽታ አምጪ ተህዋሲያን የማጽዳት ችሎታን ይጎዳል.ግባችን ትክክለኛውን የ CFTR ጂን ቅጂ ለማቅረብ እና የ ASL፣ MCT እና የሳንባ ጤናን ለማሻሻል እና እነዚህን መለኪያዎች በ Vivo1 ውስጥ የሚለኩ አዳዲስ ቴክኖሎጂዎችን ለማዳበር የሌንቲቫይራል (LV) ጂን ህክምናን ማዘጋጀት ነው።
የኤልቪ ቬክተሮች ለሳይስቲክ ፋይብሮሲስ የጂን ሕክምና ከዋነኞቹ እጩዎች አንዱ ናቸው፣ ምክንያቱም በዋናነት የሕክምናውን ጂን ወደ አየር ዌይ ባሳል ሴል (የአየር መንገዱ ግንድ ሴሎች) በቋሚነት በማዋሃድ።ይህ በጣም አስፈላጊ ነው ምክንያቱም ከሳይስቲክ ፋይብሮሲስ ጋር በተዛመደ በጂን የተስተካከሉ የአየር መተላለፊያ ህዋሶችን በመለየት መደበኛውን እርጥበት እና የንፋጭ ማጽዳትን ወደነበሩበት መመለስ ይችላሉ, ይህም የእድሜ ልክ ጥቅሞችን ያስገኛል.በ CF ውስጥ የሳንባዎች ተሳትፎ የሚጀምረው በዚህ ቦታ ስለሆነ የኤልቪ ቬክተሮች ወደ አየር መተላለፊያ መንገዶች መመራት አለባቸው.የቬክተርን ጥልቀት ወደ ሳምባ ውስጥ ማድረስ የአልቮላር ሽግግርን ሊያስከትል ይችላል, ነገር ግን ይህ በሳይስቲክ ፋይብሮሲስ ውስጥ ምንም ዓይነት የሕክምና ውጤት የለውም.ይሁን እንጂ እንደ ጂን ተሸካሚዎች ያሉ ፈሳሾች ከወሊድ በኋላ በሚተነፍሱበት ጊዜ ወደ አልቪዮሊዎች በተፈጥሮ ይፈልሳሉ3,4 እና የሕክምና ቅንጣቶች በኤምሲቲዎች በፍጥነት ወደ የአፍ ውስጥ ምሰሶ ውስጥ ይጣላሉ.የኤል.ቪ ትራንስፎርሜሽን ውጤታማነት ሴሉላር መውሰድን ለማስቻል ቬክተሩ ወደ ዒላማው ህዋሶች ቅርበት ከሚቆይበት ጊዜ ጋር በቀጥታ የተያያዘ ነው - "የመኖሪያ ጊዜ" 5 በተለመደው የክልል የአየር ፍሰት እና እንዲሁም የንፋጭ እና የ MCT ቅንጣቶችን በተቀናጀ መልኩ በቀላሉ ይቀንሳል.ለሳይስቲክ ፋይብሮሲስ, የኤል.ቪ የመኖሪያ ጊዜን በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ የማራዘም ችሎታ ከፍተኛ መጠን ያለው ሽግግር ለማምጣት አስፈላጊ ነው, ነገር ግን እስካሁን ድረስ ፈታኝ ነው.
ይህንን መሰናክል ለማሸነፍ የኤልቪ መግነጢሳዊ ቅንጣቶች (MPs) በሁለት ተጓዳኝ መንገዶች ሊረዱ እንደሚችሉ እናቀርባለን።በመጀመሪያ ፣ ኢላማውን ለማሻሻል እና የጂን ተሸካሚ ቅንጣቶች በአየር መንገዱ በትክክለኛው ቦታ ላይ እንዲሆኑ በማግኔት ወደ አየር መንገዱ ወለል ሊመሩ ይችላሉ ።እና ኤኤስኤል) ወደ ሴል ሽፋን ይንቀሳቀሳሉ 6. MPs ፀረ እንግዳ አካላትን፣ የኬሞቴራፒ መድሐኒቶችን ወይም ሌሎች ትናንሽ ሞለኪውሎችን ከሴል ሽፋን ጋር በማያያዝ ወይም በየራሳቸው የሴል ወለል ተቀባይ ተቀባይዎች ላይ በማያያዝ እና በቲሞር ቦታዎች ላይ በሚከማቹበት ጊዜ እንደ የታለመ የመድሃኒት ማመላለሻ ተሽከርካሪዎች በሰፊው ያገለግላሉ። የማይንቀሳቀስ ኤሌክትሪክ መኖር.ለካንሰር ህክምና መግነጢሳዊ መስኮች 7. ሌሎች "hyperthermic" ዘዴዎች ለማወዛወዝ መግነጢሳዊ መስኮች ሲጋለጡ MPs በማሞቅ ዕጢ ሴሎችን ለመግደል ያለመ ነው።መግነጢሳዊ መስክ የዲኤንኤን ወደ ህዋሶች ለማሸጋገር እንደ ማስተላለፊያ ወኪል የሚያገለግልበት የማግኔቲክ ሽግግር መርህ በተለምዶ ቫይረስ እና ቫይራል ያልሆኑ የጂን ቬክተሮችን በመጠቀም በቀላሉ ለመለወጥ አስቸጋሪ ለሆኑ የሕዋስ መስመሮች ጥቅም ላይ ይውላል። ..የማይንቀሳቀስ መግነጢሳዊ መስክ በሚኖርበት ጊዜ የኤል.ቪ ማግኔቶትራንስፌክሽን በብልቃጥ ውስጥ የኤል.ቪ.ኤም.ፒ. ወደ የሰው ብሮንካይተስ ኤፒተልየም ሕዋስ መስመር ማድረስ መቻሉ ከኤልቪ ቬክተር ጋር ሲነፃፀር በ 186 ጊዜ ያህል የማስተላለፍን ውጤታማነት ይጨምራል።LV MT እንዲሁ በሳይስቲክ ፋይብሮሲስ ኢን ቪትሮ ሞዴል ላይ ተተግብሯል፣ መግነጢሳዊ ሽግግር በአየር-ፈሳሽ በይነገጽ ባህሎች ውስጥ የLV ሽግግርን በ 20 እጥፍ በሳይስቲክ ፋይብሮሲስ አክታ10 ጨምሯል።ነገር ግን፣ በ Vivo አካል ውስጥ ማግኔቶትራንስፌክሽን በአንፃራዊነት ትንሽ ትኩረት ያገኘ እና በጥቂት የእንስሳት ጥናቶች 11,12,13,14,15, በተለይም በሳንባዎች ውስጥ ብቻ የተገመገመ ነው16,17.ይሁን እንጂ በሳይስቲክ ፋይብሮሲስ ውስጥ በሳንባ ሕክምና ውስጥ የማግኔት ሽግግር እድሎች ግልጽ ናቸው.ታን እና ሌሎች.(2020) “መግነጢሳዊ ናኖፓርቲሎች ውጤታማ የሳንባ መላኪያ ላይ የተደረገ የማረጋገጫ ጥናት ለወደፊት CFTR የመተንፈስ ስልቶች ሳይስቲክ ፋይብሮሲስ ያለባቸውን ታካሚዎች ክሊኒካዊ ውጤቶችን ለማሻሻል መንገድ ይከፍታል” ብሏል።
በተተገበረው መግነጢሳዊ መስክ ውስጥ የመተንፈሻ አካላት ላይ ትናንሽ መግነጢሳዊ ቅንጣቶች ባህሪን ለማየት እና ለማጥናት አስቸጋሪ ናቸው, ስለዚህም በደንብ አልተረዱም.በሌሎች ጥናቶች፣ በቀጥታ የጋዝ ቻናል የውሃ መጠንን ለመለካት በASL18 ጥልቀት እና MCT19 ባህሪ፣20 ላይ ቀጥተኛ ያልሆነ የውሃ መጠን ለውጥ እና የ ደቂቃን መጠን ለመለካት Synchrotron Propagation Based Phase Contrast X-Ray Imaging (PB-PCXI) ዘዴ አዘጋጅተናል። እና እንደ መጀመሪያ አመላካች የሕክምና ውጤታማነት ጥቅም ላይ ይውላል.በተጨማሪም የእኛ የኤምሲቲ የውጤት አሰጣጥ ዘዴ ከ10-35 µm ዲያሜትር ቅንጣቶች ከአልሙና ወይም ከከፍተኛ የማጣቀሻ መስታወት የተውጣጡ እንደ MCT ማርከሮች በPB-PCXI21 ይጠቀማሉ።ሁለቱም ዘዴዎች MPsን ጨምሮ የተለያዩ የንጥል ዓይነቶችን ለመቅረጽ ተስማሚ ናቸው.
በከፍተኛ የቦታ እና ጊዜያዊ መፍታት ምክንያት፣የእኛ PB-PCXI-based ASL እና MCT መመርመሪያዎች የነጠላ እና የጅምላ ቅንጣቶችን ተለዋዋጭነት እና ባህሪ ቅጦችን በ Vivo ለማጥናት የMP ጂን አቅርቦት ዘዴዎችን ለመረዳት እና ለማመቻቸት ይጠቅማሉ።እዚህ የምንጠቀመው አቀራረብ SPring-8 BL20B2 beamlineን በመጠቀም በጥናታችን ላይ የተመሰረተ ነው ፣ በዚህ ጊዜ የዱሚ ቬክተር መጠን በአፍንጫ እና በሳንባ ውስጥ አይጥ ውስጥ ከገባ በኋላ የፈሳሽ እንቅስቃሴን አይተናል የተለያዩ የጂን አገላለጾቻችንን ለማስረዳት ይረዳናል ። በጂን ውስጥ.የእንስሳት ጥናቶች በ 3.4 ተሸካሚ መጠን.
የዚህ ጥናት አላማ የፒቢ-ፒሲሲአይ ሲንክሮሮንን በመጠቀም የቀጥታ አይጦችን መተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ያሉ ተከታታይ የፓርላማ አባላትን እንቅስቃሴ በእይታ ለመመልከት ነበር።እነዚህ የPB-PCXI ኢሜጂንግ ጥናቶች የተነደፉት የMP ተከታታይን፣ የመግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬን እና ቦታን ለመፈተሽ በMP እንቅስቃሴ ላይ ያላቸውን ተጽእኖ ለማወቅ ነው።ውጫዊ መግነጢሳዊ መስክ የተሰጠው ኤምኤፍ እንዲቆይ ወይም ወደ ዒላማው ቦታ እንዲሄድ ይረዳል ብለን ገምተናል።እነዚህ ጥናቶች በተጨማሪም ከተቀማጭ በኋላ በአየር ቧንቧ ውስጥ የሚቀሩትን ቅንጣቶች መጠን ከፍ የሚያደርጉ የማግኔት ውቅሮችን ለመወሰን አስችሎናል.በሁለተኛው ተከታታይ ጥናቶች፣ የኤል.ቪ-ኤምፒዎችን በአየር መንገዱ ላይ በማነጣጠር የኤል.ቪ-ኤምፒኤስ አቅርቦትን እንደሚያስገኝ በማሰብ የኤልቪ-ኤምፒኤስን ወደ አይጥ አየር መንገዱ በማድረስ የተገኘውን የትራንስፎርሜሽን ንድፍ ለማሳየት ይህንን ምርጥ ውቅር ለመጠቀም አላማን ነበር። በ LV ትራንስፎርሜሽን ውጤታማነት መጨመር..
ሁሉም የእንስሳት ጥናቶች የተካሄዱት በአድላይድ ዩኒቨርሲቲ (M-2019-060 እና M-2020-022) እና በ SPring-8 Synchrotron የእንስሳት ስነ-ምግባር ኮሚቴ በተፈቀደላቸው ፕሮቶኮሎች መሰረት ነው.ሙከራዎቹ የተከናወኑት በ ARRIVE ምክሮች መሰረት ነው።
ሁሉም የኤክስሬይ ምስሎች በ BL20XU beamline በጃፓን SPring-8 synchrotron ላይ ከዚህ ቀደም ከተገለጸው ጋር ተመሳሳይ የሆነ ማዋቀር ተጠቅመዋል።በአጭሩ፣ የሙከራ ሳጥኑ ከሲንክሮሮን ማከማቻ ቀለበት 245 ሜትር ርቀት ላይ ይገኛል።የናሙና-ወደ-መመርመሪያ ርቀት 0.6 ሜትር ለቅንጣት ኢሜጂንግ ጥናቶች እና 0.3 ሜትር ለ Vivo imaging ጥናቶች የክፍል ንፅፅር ተፅእኖዎችን ለመፍጠር ጥቅም ላይ ይውላል።የ 25 ኪ.ቮ ኃይል ያለው ሞኖክሮማቲክ ጨረር ጥቅም ላይ ውሏል.ምስሎቹ የተገኙት ከፍተኛ ጥራት ካለው የኤክስሬይ ትራንስደርደር (SPring-8 BM3) ከ sCMOS ማወቂያ ጋር በማጣመር ነው።ተርጓሚው የ 10 µm ውፍረት ያለው scintillator (Gd3Al2Ga3O12) በመጠቀም ኤክስሬይ ወደ የሚታይ ብርሃን ይለውጣል፣ እሱም በ ×10 (NA 0.3) ማይክሮስኮፕ ዓላማ ወደ sCMOS ዳሳሽ ይመራል።የ sCMOS ማወቂያው ኦርካ-ፍላሽ4.0 (Hamamatsu Photonics፣ Japan) ሲሆን የድርድር መጠን 2048 × 2048 ፒክስል እና ጥሬ የፒክሰል መጠን 6.5 × 6.5 µm።ይህ ቅንብር ውጤታማ የኢሶትሮፒክ ፒክሰል መጠን 0.51 µm እና በግምት 1.1 ሚሜ × 1.1 ሚሜ የሆነ የእይታ መስክ ይሰጣል።በአተነፋፈስ ምክንያት የሚመጡ የእንቅስቃሴ ቅርሶችን በመቀነስ በአየር መንገዱ ውስጥ እና ውጭ ያሉትን መግነጢሳዊ ቅንጣቶች ከሲግናል-ወደ-ጫጫታ ሬሾን ከፍ ለማድረግ የ100 ሚሴ የተጋላጭነት ጊዜ ተመርጧል።ለ Vivo ጥናቶች፣ በተጋላጭነት መካከል ያለውን የኤክስሬይ ጨረር በመዝጋት የጨረራውን መጠን ለመገደብ ፈጣን የኤክስሬይ መዝጊያ በኤክስ ሬይ መንገድ ላይ ተቀምጧል።
የ BL20XU ኢሜጂንግ ክፍል የባዮሴፍቲ ደረጃ 2 የተረጋገጠ ስላልሆነ የኤልቪ ሚዲያ በማንኛውም የSPring-8 PB-PCXI ኢሜጂንግ ጥናት ላይ ጥቅም ላይ አልዋለም።በምትኩ፣ ከተለያዩ መጠኖች፣ ቁሳቁሶች፣ የብረት ውህዶች እና አፕሊኬሽኖች የሚሸፍኑ ሁለት የንግድ አቅራቢዎች ጥሩ ባህሪ ያላቸውን የፓርላማ አባላትን መርጠናል - በመጀመሪያ መግነጢሳዊ መስኮች በመስታወት ካፒታል ውስጥ የፓርላማ አባላትን እንቅስቃሴ እንዴት እንደሚነኩ ለመረዳት እና ከዚያም በ ሕያው አየር መንገዶች.ላዩን።የMP መጠን ከ 0.25 እስከ 18 µm ይለያያል እና ከተለያዩ ቁሳቁሶች የተሰራ ነው (ሠንጠረዥ 1 ይመልከቱ) ነገር ግን የእያንዳንዱ ናሙና ስብጥር በMP ውስጥ ያለውን መግነጢሳዊ ቅንጣቶችን ጨምሮ, አይታወቅም.ባደረግናቸው ሰፊ የMCT ጥናቶች 19፣ 20፣ 21፣ 23፣ 24 መሰረት፣ እስከ 5 µm ድረስ ያሉ የፓርላማ አባላት በመተንፈሻ ቱቦ ወለል ላይ ለምሳሌ፣ የተሻሻለ የMP እንቅስቃሴን ታይነት ለማየት ተከታታይ ፍሬሞችን በመቀነስ ሊታዩ እንደሚችሉ እንጠብቃለን።አንድ ነጠላ ኤምፒ 0.25 µm ከምስል መሳሪያው ጥራት ያነሰ ነው፣ ነገር ግን PB-PCXI የእነሱ የድምጽ መጠን ንፅፅር እና ከተቀመጡ በኋላ የተቀመጡበት የንጣፍ ፈሳሽ እንቅስቃሴን እንደሚያውቅ ይጠበቃል።
በሰንጠረዡ ውስጥ ለእያንዳንዱ MP ናሙናዎች.1 የተዘጋጀው በ 20 μl ብርጭቆ ካፕሊየሮች (Drummond Microcaps, PA, USA) ውስጣዊ ዲያሜትር 0.63 ሚሜ ነው.የኮርፐስኩላር ቅንጣቶች በውሃ ውስጥ ይገኛሉ, CombiMag ቅንጣቶች ግን በአምራቹ ባለቤትነት ፈሳሽ ውስጥ ይገኛሉ.እያንዳንዱ ቱቦ በግማሽ በፈሳሽ ተሞልቷል (በግምት 11 µl) እና በናሙና መያዣው ላይ ይቀመጣል (ስእል 1 ይመልከቱ)።የመስታወት ካፊላሪዎች በምስሉ ክፍል ውስጥ በደረጃው ላይ በአግድም ተቀምጠዋል, በቅደም ተከተል እና በፈሳሹ ጠርዝ ላይ ተቀምጠዋል.19 ሚሜ ዲያሜትር (28 ሚሜ ርዝመት ያለው) ኒኬል-ሼል ማግኔት ብርቅዬ ምድር፣ ኒዮዲሚየም፣ ብረት እና ቦሮን (NdFeB) (N35፣ ድመት ቁ. LM1652፣ ጄይካር ኤሌክትሮኒክስ፣ አውስትራሊያ) የተሠራው ከ 1.17 ቲ ሪማንንስ ጋር ተያይዟል። ለማሳካት የተለየ የማስተላለፊያ ሠንጠረዥ በመስራት ጊዜ ቦታዎን በርቀት ይለውጡ።የኤክስሬይ ምስል የሚጀምረው ማግኔቱ በግምት 30 ሚሜ ከናሙናው በላይ ሲቀመጥ እና ምስሎች በሰከንድ 4 ክፈፎች ሲገኙ ነው።በምስሉ ወቅት ማግኔቱ ወደ መስታወት ካፒላሪ ቱቦ (በ 1 ሚሊ ሜትር ርቀት ላይ) ቀርቧል እና ከዚያም የመስክ ጥንካሬን እና የቦታውን ተፅእኖ ለመገምገም በቧንቧው ላይ ተንቀሳቅሷል.
በ xy ናሙና የትርጉም ደረጃ ላይ የMP ናሙናዎችን በመስታወት ካፒላሪዎች ውስጥ የያዘ ኢንቪትሮ ኢሜጂንግ ማዋቀር።የኤክስሬይ ጨረር መንገድ በቀይ ነጥብ መስመር ምልክት ተደርጎበታል።
አንድ ጊዜ የፓርላማ አባላት በብልቃጥ ታይነት ከተመሠረተ፣ የነሱ ንዑስ ክፍል በዱር-አይነት ሴት ዊስታር አልቢኖ አይጦች (~ 12 ሳምንታት ዕድሜ ያለው፣ ~ 200 ግ) በ vivo ተፈትኗል።Medetomidine 0.24 mg/k (Domitor®, Zenoaq, Japan), midazolam 3.2 mg/kg (Dormicum®, Astellas Pharma, Japan) እና butorphanol 4 mg/kg (Vetorphale®, Meiji Seika).አይጦች በፋርማ (ጃፓን) ድብልቅ በማህፀን ውስጥ በመርፌ ደንዝዘዋል።ከማደንዘዣ በኋላ በመተንፈሻ ቱቦ ዙሪያ ያለውን ፀጉር በማንሳት የኢንዶትራክሽን ቱቦን (ET; 16 Ga intravenous cannula, Terumo BCT) በማስገባት እና የሙቀት ከረጢት ባለው ብጁ በተሰራ የኢሜጂንግ ሳህን ላይ በአግድም አቀማመጥ ላይ እንዳይንቀሳቀሱ በማድረግ ለምስል ተዘጋጅተዋል። የሰውነት ሙቀትን ለመጠበቅ.22. በምስል 2 ሀ ላይ እንደሚታየው የመተንፈሻ ቱቦውን በአግድም በኤክስ ሬይ ምስል ላይ ለማጣመር በትንሹ አንግል ላይ የኢሜጂንግ ፕላስቲኩ ከናሙና ደረጃ ጋር ተያይዟል።
(ሀ) በ SPring-8 ኢሜጂንግ ክፍል ውስጥ Vivo imaging ማዋቀር፣ የኤክስሬይ ጨረር መንገድ በቀይ ነጥብ መስመር ምልክት ተደርጎበታል።(b,c) ትራሄል ማግኔት ለትርጉም በርቀት የተከናወነው ሁለት ኦርቶጎን የተገጠሙ የአይፒ ካሜራዎችን በመጠቀም ነው።በስክሪኑ ላይ ባለው የምስሉ ግራ በኩል፣የሽቦ ምልልሱ ጭንቅላትን የሚይዝ እና በ ET ቱቦ ውስጥ የተገጠመ የማስረከቢያ ቦይ ማየት ይችላሉ።
የርቀት ቁጥጥር የሚደረግበት የሲሪንጅ ፓምፕ ሲስተም (UMP2፣ World Precision Instruments፣ Sarasota፣ FL) 100 μl ብርጭቆ መርፌን በመጠቀም ከ PE10 ቱቦዎች (0.61 ሚሜ ኦዲ፣ 0.28 ሚሜ መታወቂያ) 30 ጋ መርፌ ጋር ተገናኝቷል።የ endotracheal ቧንቧ በሚያስገቡበት ጊዜ ጫፉ በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ በትክክለኛው ቦታ ላይ መሆኑን ለማረጋገጥ ቱቦውን ምልክት ያድርጉበት.ማይክሮፓምፕን በመጠቀም የሲሪንጅ ቧንቧው ተወግዶ የቧንቧው ጫፍ በኤምፒ ናሙና ውስጥ እንዲደርስ ተደርጓል.የተጫነው የመላኪያ ቱቦ ወደ endotracheal tube ውስጥ ገብቷል፣ ጫፉንም ከጠበቅነው መግነጢሳዊ መስክ በጣም ጠንካራው ክፍል ላይ አስቀምጦታል።የምስል ማግኛ ቁጥጥር የተደረገው በአርዱዪኖ ላይ ከተመሰረተው የሰዓት አቆጣጠር ሳጥን ጋር በተገናኘ የትንፋሽ ማወቂያን በመጠቀም ነው፣ እና ሁሉም ምልክቶች (ለምሳሌ የሙቀት መጠን፣ መተንፈሻ፣ መዝጊያ ክፍት/ዝግ እና ምስል ማግኛ) የተቀዳው በPowerlab እና LabChart (AD Instruments፣ Sydney፣ Australia) በመጠቀም ነው። 22 ኢሜጂንግ መኖሪያ ቤቱ በማይገኝበት ጊዜ፣ ሁለት የአይፒ ካሜራዎች (Panasonic BB-SC382) በግምት 90° በመካከላቸው ተቀምጠዋል እና በምስል ወቅት የማግኔትን አቀማመጥ ከትራኪው አንፃር ለመቆጣጠር ይጠቅማሉ (ምስል 2 ለ፣ ሐ)።የእንቅስቃሴ ቅርሶችን ለመቀነስ፣ በአንድ ትንፋሽ አንድ ምስል የተገኘው በተርሚናል መተንፈሻ ፍሰት ደጋ ወቅት ነው።
ማግኔቱ ከሁለተኛው ደረጃ ጋር ተያይዟል, ይህም በምስሉ አካል ውጭ ከርቀት ሊገኝ ይችላል.የማግኔቱ የተለያዩ አቀማመጦች እና አወቃቀሮች ተፈትነዋል፡ ከነዚህም ውስጥ፡ ከትራክቱ በላይ በግምት 30° በሆነ አንግል ላይ ተቀምጧል (ውቅሮች በስእል 2a እና 3a ይታያሉ)።አንድ ማግኔት ከእንስሳው በላይ እና ሌላው ከታች, ምሰሶቹ ለመሳብ የተቀመጡ ናቸው (ምስል 3 ለ)., አንድ ማግኔት ከእንስሳው በላይ እና አንድ ከታች, ምሰሶቹ ለመጸየፍ የተቀመጡ ናቸው (ምስል 3 ሐ) እና አንድ ማግኔት ከላይ እና ከትራክታ ጋር ቀጥ ያለ (ምስል 3d).እንስሳውን እና ማግኔትን ካዘጋጁ በኋላ እና በሙከራ ላይ ያለውን MP ወደ መርፌው ፓምፕ ከጫኑ በኋላ ምስሎችን ሲገዙ 50 µl መጠን በ 4 µl/ሴኮንድ ያቅርቡ።ምስሎችን ማግኘቱን በሚቀጥልበት ጊዜ ማግኔቱ ወደ ኋላ እና ወደ ፊት ይንቀሳቀሳል።
የማግኔት ውቅረት ለ vivo ኢሜጂንግ (ሀ) አንድ ማግኔት ከመተንፈሻ ቱቦ በላይ በግምት 30°፣ (ለ) ለመሳብ የተዋቀሩ ሁለት ማግኔቶች፣ (ሐ) ሁለት ማግኔቶችን ለመጸየፍ የተዋቀሩ፣ (መ) አንድ ማግኔት ከላይ እና ቀጥ ብሎ ወደ የመተንፈሻ ቱቦ.ተመልካቹ በአፍ ወደ ሳምባው በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ተመለከተ እና የኤክስሬይ ጨረር በግራ በኩል በግራ በኩል አልፎ ወደ ቀኝ ወጣ.ማግኔቱ በአየር መተላለፊያው ርዝመት ወይም በግራ እና በቀኝ ከትራክቱ በላይ ወደ ኤክስ ሬይ ጨረር አቅጣጫ ይንቀሳቀሳል.
በተጨማሪም የአተነፋፈስ እና የልብ ምት መቀላቀል በማይኖርበት ጊዜ በአየር መንገዱ ውስጥ ያሉትን ቅንጣቶች ታይነት እና ባህሪ ለመወሰን ፈልገን ነበር.ስለዚህ, በምስሉ ጊዜ ማብቂያ ላይ, እንስሳት በፔንቶባርቢታል ከመጠን በላይ በመጠጣት (ሶምኖፔንቲል, ፒትማን-ሙር, ዋሽንግተን መሻገሪያ, ዩኤስኤ; ~ 65 mg / kg ip) በሰብአዊነት ተወግደዋል.አንዳንድ እንስሳት በምስሉ መድረክ ላይ ቀርተዋል, እና የአተነፋፈስ እና የልብ ምቱ ከተቋረጠ በኋላ, የምስል ሂደቱ ተደግሟል, ምንም MP በአየር መንገዱ ላይ የማይታይ ከሆነ ተጨማሪ የ MP መጠን ይጨምራል.
የተገኙት ምስሎች በጠፍጣፋ እና ጥቁር መስክ ላይ ተስተካክለው ከዚያም በ MATLAB (R2020a, The Mathworks) የተጻፈ ብጁ ስክሪፕት በመጠቀም ወደ ፊልም (20 ክፈፎች በሰከንድ፤ 15–25 × መደበኛ ፍጥነት እንደ መተንፈሻ መጠን) ተሰብስበዋል።
በኤልቪ ጂን ቬክተር አቅርቦት ላይ የተደረጉ ሁሉም ጥናቶች የተካሄዱት በአድላይድ ላብራቶሪ የእንስሳት ምርምር ማዕከል ዩኒቨርሲቲ ሲሆን የ SPring-8 ሙከራ ውጤትን ለመጠቀም በማግኔት መስክ ውስጥ የ LV-MP አቅርቦት በ Vivo ውስጥ የጂን ዝውውርን ሊያሳድግ ይችላል የሚለውን ለመገምገም ያለመ ነው. .የኤምኤፍ እና መግነጢሳዊ መስክን ተፅእኖ ለመገምገም ሁለት የእንስሳት ቡድኖች ተካሂደዋል-አንድ ቡድን ከኤልቪ ኤምኤፍ ጋር በማግኔት አቀማመጥ, እና ሌላኛው ቡድን ከ LV MF ጋር ያለ ማግኔት (ማግኔት) ያለ መቆጣጠሪያ ቡድን በመርፌ ተካቷል.
ቀደም ሲል በተገለጹት ዘዴዎች 25, 26 በመጠቀም የኤልቪ ጂን ቬክተሮች ተፈጥረዋል.የLacZ ቬክተር በMPSV የተዋሃደ አስተዋዋቂ (LV-LacZ) የሚመራ የኑክሌር አካባቢያዊ ቤታ-ጋላክቶሲዳሴን ጂን ይገልጻል፣ ይህም በተለወጡ ህዋሶች ውስጥ ሰማያዊ ምላሽ የሚሰጥ፣ ከፊት እና በሳንባ ቲሹ ክፍሎች ላይ ይታያል።ቲትሬሽን በ TU/ml ውስጥ ያለውን ቲተር ለማስላት በሂሞቲሜትር በመጠቀም የLacZ-positive ሕዋሳት ቁጥር በእጅ በመቁጠር በሴል ባህሎች ውስጥ ተከናውኗል።ተሸካሚዎች በ -80 ዲግሪ ሴንቲግሬድ የሙቀት መጠን ይጠበቃሉ ፣ ከመጠቀማቸው በፊት ይቀልጣሉ እና 1: 1 ን በመቀላቀል እና በበረዶ ላይ ቢያንስ ለ 30 ደቂቃዎች በመክተት ወደ CombiMag ይታሰራሉ።
መደበኛ ስፕራግ ዳውሊ አይጦች (n = 3/ቡድን ፣ ~ 2-3 ሰመመን የተደረገ ip ከ 0.4mg/kg medetomidine (Domitor, Ilium, Australia) እና 60mg/kg ketamine (Ilium, Australia) በ 1 ወር እድሜ) ip ) መርፌ እና ቀዶ ጥገና ያልሆነ የአፍ ውስጥ ቦይ በ 16 ጋ ደም ወሳጅ ቦይ።የመተንፈሻ ቱቦ ቲሹ የ LV ትራንስፎርሜሽን ማግኘቱን ለማረጋገጥ ቀደም ሲል በተገለጸው የሜካኒካል መዛባት ፕሮቶኮላችን በመጠቀም የአየር መተንፈሻ ቱቦው ወለል በሽቦ ቅርጫት (ኤን-ክበብ ፣ የኒቲኖል ድንጋይ ማውጫ ያለ ጫፍ NTSE-022115) በአክሲየል መታሸት ነበር - UDH , ኩክ ሜዲካል፣ አሜሪካ) 30 p28.ከዚያም በባዮሴፍቲ ካቢኔ ውስጥ ከተፈጠረው ችግር ከ10 ደቂቃ ገደማ በኋላ የLV-MP ትራኪካል አስተዳደር ተካሂዷል።
በዚህ ሙከራ ውስጥ ጥቅም ላይ የዋለው መግነጢሳዊ መስክ ልክ እንደ ኢንቪቮ ኤክስ ሬይ ጥናት ተዋቅሯል፣ ተመሳሳይ ማግኔቶች በመተንፈሻ ቱቦው ላይ ከዲስቲልሽን ስቴንት ክላምፕስ ጋር ተይዘዋል።(ስእል 4)።ቀደም ሲል እንደተገለፀው የ 50 µl መጠን (2 x 25 µl aliquots) LV-MP ወደ መተንፈሻ ቱቦ (n = 3 እንስሳት) ደርሷል።የቁጥጥር ቡድን (n = 3 እንስሳት) ማግኔት ሳይጠቀም ተመሳሳይ LV-MP ተቀብሏል.ማከሚያው ከተጠናቀቀ በኋላ ካንሱላ ከ endotracheal tube ውስጥ ይወገዳል እና እንስሳው ይወጣል.ማግኔቱ ከመውጣቱ በፊት ለ 10 ደቂቃዎች ይቆያል.አይጦች ከቆዳ በታች በሜሎክሲካም (1 ml/kg) (ኢሊየም፣ አውስትራሊያ)፣ ከዚያም ማደንዘዣን በማጥፋት 1 mg/kg አቲፓማዞል ሃይድሮክሎራይድ (አንቲሴዳን፣ ዞቲስ፣ አውስትራሊያ) ውስጠ-ፔሪቶናል መርፌ ተወስደዋል።ማደንዘዣ ሙሉ በሙሉ እስኪያገግሙ ድረስ አይጦች እንዲሞቁ እና ተስተውለዋል.
በባዮሎጂካል ደህንነት ካቢኔ ውስጥ የኤልቪ-ኤምፒ ማቅረቢያ መሳሪያ.የ ET ቱቦ ፈዛዛ ግራጫ Luer-መቆለፊያ እጅጌ ከአፍ መውጣቱን እና በምስሉ ላይ የሚታየው የጄል ፒፔት ጫፍ በ ET ቱቦ ውስጥ ወደሚፈለገው ጥልቀት በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ እንደገባ ማየት ትችላለህ።
ከLV-MP አስተዳደር ሂደት ከአንድ ሳምንት በኋላ እንስሳት 100% CO2 በመተንፈስ ሰብአዊ በሆነ መንገድ ተሠዉተዋል እና የLacZ አገላለጽ የእኛን ደረጃውን የጠበቀ የ X-gal ሕክምናን በመጠቀም ተገምግሟል።በኤንዶትራክሽናል ቱቦ አቀማመጥ ምክንያት የሜካኒካል ጉዳት ወይም ፈሳሽ ማቆየት በመተንተን ውስጥ እንዳይካተት ለማረጋገጥ ሦስቱ በጣም የድድ ካርቱላጅ ቀለበቶች ተወግደዋል።እያንዳንዱ የመተንፈሻ ቱቦ ለመተንተን ሁለት ግማሾችን ለማግኝት በርዝመቱ የተቆረጠ ሲሆን የሲሊኮን ጎማ (ሲልጋርድ, ዶው ኢንክ) በያዘው ኩባያ ውስጥ የሚኒቲን መርፌን (ደቂቃን የሳይንስ መሳሪያዎች) በመጠቀም የብርሃን ንጣፍን በዓይነ ሕሊናህ ለማየት ችሏል።የተቀየሩት ሴሎች ስርጭት እና ባህሪ በኒኮን ማይክሮስኮፕ (SMZ1500) በዲጂላይት ካሜራ እና TCapture ሶፍትዌር (Tucsen Photonics, China) በመጠቀም በፊት ፎቶግራፍ ተረጋግጧል.ምስሎች በ 20x ማጉላት (ለመተንፈሻ ቱቦው ሙሉ ስፋት ከፍተኛውን አቀማመጥን ጨምሮ) የተገኙ ሲሆን, የትራክቱ አጠቃላይ ርዝመት ደረጃ በደረጃ ይታያል, ይህም ምስሎች "የተጣበቁ" እንዲሆኑ በእያንዳንዱ ምስል መካከል በቂ መደራረብን ያቀርባል.ከእያንዳንዱ የመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ያሉት ምስሎች የፕላኔር ሞሽን ስልተቀመርን በመጠቀም የተቀናበረ ምስል አርታኢ ስሪት 2.0.3 (ማይክሮሶፍት ምርምር) በመጠቀም ወደ አንድ የተዋሃደ ምስል ተጣምረዋል። የLacZ አገላለጽ አካባቢ ከእያንዳንዱ እንስሳ 0.35 <Hue <0.58፣ Saturation> 0.15 እና Value< 0.7 ቅንብሮችን በመጠቀም አውቶሜትድ MATLAB ስክሪፕት (R2020a፣ MathWorks) ቀደም ሲል እንደተገለጸው28 በመጠቀም ተቆጥሯል። የLacZ አገላለጽ አካባቢ ከእያንዳንዱ እንስሳ በትራኪካል ስብጥር ምስሎች ውስጥ የሚለካው ከዚህ ቀደም እንደተገለጸው አውቶሜትድ MATLAB ስክሪፕት (R2020a፣ MathWorks) በመጠቀም፣ የ0.35 <Hue <0.58፣ Saturation> 0.15 እና እሴት <0.7 በመጠቀም። Площадь экспрессии LacZ в составных изображениях трахеи от каждого животного была количественно определена с использованием автоматизированного сценария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее28, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0 ,7. የLacZ አገላለጽ አካባቢ ከእያንዳንዱ እንስሳ በተቀነባበረ የትራፊክ ምስሎች ውስጥ የሚለካው ከዚህ ቀደም እንደተገለጸው 0.35 ቅንብሮችን በመጠቀም አውቶማቲክ MATLAB ስክሪፕት (R2020a፣ MathWorks) በመጠቀም ነው።0.15 እና እሴት<0 .7.如 前所 述 自动 ማትላቢ 脚本 (r2020A, Mat 只 只 动物 动物 的 复合 气管 气管 复合 复合 复合 复合 复合 复合 复合 复合 图像 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调 色调, 0.15 和值 <11.15 和值>.如 前所 述 自动 自动 ማትላቢ 脚本 ((r2020A, Mat 气管 的 的 气管 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 量化 色调] <0.15 和值> 0.15 的. ……………………………………………………. HIP Области экспрессии LacZ на составных изображениях трахеи каждого животного количественно определяли с использованием автоматизированного сценария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0,7 . የLacZ አገላለጽ ቦታዎች በእያንዳንዱ የእንስሳት መተንፈሻ ቱቦ ውስጥ በተቀነባበሩ ምስሎች ላይ የሚለካው አውቶሜትድ MATLAB ስክሪፕት (R2020a, MathWorks) በመጠቀም ነው ከዚህ ቀደም የ 0.35 < hue < 0.58, saturation> 0.15 እና እሴት <0.7 በመጠቀም እንደተገለጸው.በGIMP v2.10.24 ውስጥ የሕብረ ሕዋሳትን ቅርጾችን በመከታተል የቲሹ አካባቢን ለመለየት እና ከትራክቸል ቲሹ ውጭ ያሉ የውሸት ምልክቶችን ለመከላከል ለእያንዳንዱ ድብልቅ ምስል ጭምብል በእጅ ተፈጠረ።ከእያንዳንዱ እንስሳ የተውጣጡ ምስሎች የተበከሉት ቦታዎች ለእንስሳቱ አጠቃላይ የቆሸሸ ቦታ እንዲሰጡ ተደርገዋል።የተቀባው ቦታ መደበኛ የሆነ ቦታ ለማግኘት በጠቅላላው ጭምብሉ ተከፋፍሏል።
እያንዳንዱ የመተንፈሻ ቱቦ በፓራፊን ውስጥ ተተክሏል እና 5 μm ውፍረት ያለው ክፍል ተከፍሏል።ክፍሎች ለ 5 ደቂቃዎች በገለልተኛ ፈጣን ቀይ ቀለም ተሸፍነዋል እና ምስሎች የተገኙት በኒኮን ግርዶሽ E400 ማይክሮስኮፕ ፣ DS-Fi3 ካሜራ እና የኤንአይኤስ ኤለመንት ቀረጻ ሶፍትዌር (ስሪት 5.20.00) በመጠቀም ነው።
ሁሉም ስታትስቲካዊ ትንታኔዎች የተከናወኑት በግራፍፓድ ፕሪዝም v9 (ግራፍፓድ ሶፍትዌር፣ ኢንክ.) ነው።ስታትስቲካዊ ጠቀሜታ በ p ≤ 0.05 ላይ ተቀምጧል.መደበኛነት የሻፒሮ-ዊልክ ፈተናን በመጠቀም ተፈትኗል እና የላክዜድ ማቅለሚያ ልዩነቶች ያልተጣመረ ቲ-ሙከራን በመጠቀም ተገምግመዋል።
በሰንጠረዥ 1 የተገለጹት ስድስት የፓርላማ አባላት በ PCXI ተመርምረዋል፣ እና ታይነት በሰንጠረዥ 2 ውስጥ ተገልጿል. ሁለት የፖሊስታይሬን MPs (MP1 እና MP2፣ 18 μm እና 0.25 µm፣ በቅደም ተከተል) በ PCXI አይታዩም፣ ነገር ግን የተቀሩት ናሙናዎች ሊታወቁ ይችላሉ። (ምሳሌዎች በስእል 5 ይታያሉ).MP3 እና MP4 በደካማ የሚታዩ ናቸው (10-15% Fe3O4፣ 0.25 µm እና 0.9 µm፣ በቅደም ተከተል)።ምንም እንኳን MP5 (98% Fe3O4፤ 0.25 µm) የተሞከሩትን አንዳንድ ጥቃቅን ቅንጣቶች ቢይዝም በጣም የተገለጸው ነበር።የ CombiMag MP6 ምርት ለመለየት አስቸጋሪ ነው።በሁሉም ሁኔታዎች፣ ማግኔቱን ወደ ኋላ እና ወደ ፊት ከካፒታል ጋር ትይዩ በማድረግ ኤምኤፍስን የማወቅ ችሎታችን በእጅጉ ተሻሽሏል።ማግኔቶቹ ከካፒላሪው ርቀው ሲወጡ፣ ቅንጣቶቹ በረጅም ሰንሰለቶች ተጎትተው ይወጡ ነበር፣ ነገር ግን ማግኔቶቹ ሲቃረቡ እና የመግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬ ሲጨምር፣ ቅንጣቶቹ ወደ ካፊላሪው የላይኛው ገጽ ሲሰደዱ ቅንጣቢዎቹ ሰንሰለቶች አጠረ (ተጨማሪ ቪዲዮ S1 ይመልከቱ)። : MP4) ፣ ላይ ላዩን ቅንጣት ጥግግት እየጨመረ።በተቃራኒው ማግኔቱ ከካፒላሪ ሲወጣ የመስክ ጥንካሬ ይቀንሳል እና የፓርላማ አባላት ከካፒላሪው የላይኛው ገጽ ላይ ወደ ሚዘረጋ ረጅም ሰንሰለቶች ይደረደራሉ (ተጨማሪ ቪዲዮ S2፡ MP4 ይመልከቱ)።ማግኔቱ መንቀሳቀሱን ካቆመ በኋላ, ወደ ሚዛኑ ቦታ ከደረሱ በኋላ ቅንጣቶች ለተወሰነ ጊዜ መንቀሳቀስ ይቀጥላሉ.ኤምፒው ወደ ካፊላሪው የላይኛው ገጽ ሲንቀሳቀስ እና ሲርቅ መግነጢሳዊ ቅንጣቶች በፈሳሹ ውስጥ ቆሻሻን ይሳሉ።
በ PCXI ስር ያለው የMP ታይነት በናሙናዎች መካከል በእጅጉ ይለያያል።(ሀ) MP3፣ (ለ) MP4፣ (ሐ) MP5 እና (መ) MP6።እዚህ የሚታዩት ምስሎች በሙሉ የተወሰዱት ከካፒታል በላይ 10 ሚሜ ያህል ርቀት ባለው ማግኔት ነው።በግልጽ የሚታዩት ትላልቅ ክበቦች በካፒቢሎች ውስጥ የተዘጉ የአየር አረፋዎች ናቸው, ይህም የክፍል ንፅፅር ምስል ጥቁር እና ነጭ የጠርዝ ባህሪያትን በግልጽ ያሳያሉ.ቀይ ሳጥኑ ንፅፅርን የሚያሻሽል ማጉላትን ያመለክታል.በሁሉም አኃዞች ውስጥ ያሉት የማግኔት ዑደቶች ዲያሜትሮች ለመመዘን እንዳልሆኑ እና ከሚታየው በግምት 100 እጥፍ እንደሚበልጡ ልብ ይበሉ።
ማግኔቱ በካፒሉ አናት ላይ ወደ ግራ እና ቀኝ ሲንቀሳቀስ የኤምፒ ሕብረቁምፊው አንግል ከማግኔት ጋር ይጣጣማል (ስእል 6 ይመልከቱ) በዚህም የመግነጢሳዊ መስክ መስመሮችን ይለያል።ለ MP3-5, ኮርዱ ወደ ጣራው ጥግ ከደረሰ በኋላ, ቅንጣቶቹ በካፒታል የላይኛው ገጽ ላይ ይጎተታሉ.ይህ ብዙውን ጊዜ የፓርላማ አባላት መግነጢሳዊ መስኩ በጣም ጠንካራ በሆነበት አቅራቢያ ወደ ትላልቅ ቡድኖች እንዲሰበሰቡ ያደርጋል (ተጨማሪ ቪዲዮ S3፡ MP5 ይመልከቱ)።ይህ በተለይ ወደ ካፊላሪ መጨረሻ ሲቃረብ በግልጽ ይታያል ፣ ይህም MP እንዲጠራቀም እና በፈሳሽ-አየር በይነገጽ ላይ እንዲያተኩር ያደርገዋል።በMP3-5 ውስጥ ካሉት ለመለየት አስቸጋሪ የሆኑት በMP6 ውስጥ ያሉት ቅንጣቶች ማግኔቱ በካፒላሪው ላይ ሲንቀሳቀስ አይጎትቱም፣ ነገር ግን የኤምፒ ሕብረቁምፊዎች ተለያይተዋል፣ ይህም ቅንጣቶችን በእይታ ውስጥ ትተውታል (ተጨማሪ ቪዲዮ S4፡ MP6 ይመልከቱ)።በአንዳንድ ሁኔታዎች ማግኔቱን ከምስሉ ቦታው ረጅም ርቀት በማንቀሳቀስ የተተገበረው መግነጢሳዊ መስክ ሲቀንስ፣ የቀሩት MPs ቀስ በቀስ ወደ ቱቦው የታችኛው ወለል በስበት ኃይል ይወርዳሉ፣ በሕብረቁምፊው ውስጥ ይቀራሉ (ተጨማሪ ቪዲዮ S5፡ MP3 ይመልከቱ) .
ማግኔቱ ከካፒታል በላይ ወደ ቀኝ ሲንቀሳቀስ የ MP string አንግል ይለወጣል.(ሀ) MP3፣ (ለ) MP4፣ (ሐ) MP5 እና (መ) MP6።ቀይ ሳጥኑ ንፅፅርን የሚያሻሽል ማጉላትን ያመለክታል.እባክዎን ተጨማሪ ቪዲዮዎቹ ለመረጃ ዓላማዎች መሆናቸውን ልብ ይበሉ ፣ ምክንያቱም በእነዚህ የማይንቀሳቀሱ ምስሎች ውስጥ የማይታዩ ጠቃሚ ቅንጣት አወቃቀሮችን እና ተለዋዋጭ መረጃዎችን ያሳያሉ።
የእኛ ፈተናዎች ማግኔትን ወደ ኋላ እና ወደ ፊት ቀስ ብሎ በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ማንቀሳቀስ የኤምኤፍኤፍ ምስልን በ Vivo ውስጥ ካለው ውስብስብ እንቅስቃሴ አንፃር ያመቻቻል።የ polystyrene ዶቃዎች (MP1 እና MP2) በካፒላሪ ውስጥ ስላልታዩ ምንም የ In vivo ሙከራዎች አልተደረጉም.እያንዳንዳቸው የቀሩት አራት ኤምኤፍኤዎች በቪቮ ውስጥ ተፈትነዋል የማግኔት ረጅም ዘንግ በመተንፈሻ ቱቦ ላይ በ 30 ° ወደ ቁመታዊ አንግል ላይ (ምስል 2 ለ እና 3 ሀ ይመልከቱ) ፣ ይህም ረዘም ያለ የኤምኤፍ ሰንሰለቶች ስላስገኘ እና የበለጠ ውጤታማ ነበር ። ከማግኔት ይልቅ..ውቅረት ተቋርጧል።MP3 ፣ MP4 እና MP6 በማንኛውም የቀጥታ እንስሳት የመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ አልተገኙም።እንስሳትን በሰብአዊነት ከገደሉ በኋላ የአይጦችን መተንፈሻ ትራክት በሚታዩበት ጊዜ ፣በሲሪንጅ ፓምፕ በመጠቀም ተጨማሪ መጠን ሲጨመር ቅንጣቶቹ የማይታዩ ናቸው።MP5 ከፍተኛው የብረት ኦክሳይድ ይዘት ነበረው እና ብቸኛው የሚታየው ቅንጣት ነበር፣ ስለዚህ የMP ባህሪን Vivo ውስጥ ለመገምገም እና ለመለየት ጥቅም ላይ ውሏል።
MF በሚያስገቡበት ጊዜ ማግኔትን በመተንፈሻ ቱቦ ላይ ማስቀመጥ ብዙዎችን አስከትሏል, ነገር ግን ሁሉም አይደሉም, MFs በእይታ መስክ ላይ ያተኮሩ ናቸው.የንጥረ ነገሮች ትራክ መግባቱ በሰብአዊ እርካታ በተወሰዱ እንስሳት ላይ በደንብ ይስተዋላል።ምስል 7 እና ተጨማሪ ቪዲዮ ኤስ 6፡ MP5 ፈጣን መግነጢሳዊ ቀረጻ እና ቅንጣትን በ ventral trachea ወለል ላይ አሰላለፍ ያሳያል፣ ይህም የፓርላማ አባላትን ወደሚፈለጉት የአየር ቧንቧ አካባቢዎች ማነጣጠር እንደሚቻል ያሳያል።ኤምኤፍ ከተሰጠ በኋላ የመተንፈሻ ቱቦው ላይ በጥልቀት ሲፈልጉ አንዳንድ ኤምኤፍኤስ ወደ ካሪና ቅርብ ሆነው ተገኝተዋል ይህም ሁሉንም ኤም ኤፍ ለመሰብሰብ እና ለመያዝ በቂ ያልሆነ የመግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬ ያሳያል ምክንያቱም በፈሳሽ አስተዳደር ወቅት ከፍተኛውን የማግኔቲክ መስክ ጥንካሬ ክልል ውስጥ ገብተዋል።ሂደት.ነገር ግን፣ የድህረ ወሊድ ኤምፒ ትኩረቶች በምስሉ አካባቢ ከፍተኛ ነበሩ፣ ይህም ብዙ የፓርላማ አባላት የተተገበረው መግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬ ከፍተኛ በሆነባቸው የአየር መተላለፊያ ክልሎች ውስጥ እንደሚቆዩ ይጠቁማል።
የ(ሀ) በፊት እና (ለ) ኤምፒ5ን ወደ መተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ከተረከቡ በኋላ በቅርብ ጊዜ የተገለለ አይጥ ከምስል ቦታው በላይ የተቀመጠ ማግኔት ያለው።የሚታየው ቦታ በሁለት የ cartilaginous ቀለበቶች መካከል ይገኛል።ኤምፒ ከመሰጠቱ በፊት በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ የተወሰነ ፈሳሽ አለ.ቀይ ሳጥኑ ንፅፅርን የሚያሻሽል ማጉላትን ያመለክታል.እነዚህ ምስሎች የተወሰዱት በS6፡ MP5 ማሟያ ቪዲዮ ውስጥ ከሚታየው ቪዲዮ ነው።
መግነጢሳዊውን በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ በማንቀሳቀስ በአየር መንገዱ ወለል ላይ ባለው የኤምፒ ሰንሰለቱ አንግል ላይ ለውጥ አምጥቷል ፣ ይህም በካፒላሪዎች ውስጥ እንደሚታየው (ምስል 8 እና ተጨማሪ ቪዲዮ S7: MP5 ይመልከቱ)።ነገር ግን፣ በጥናታችን ውስጥ፣ የፓርላማ አባላት ካፒላሪስ ሊያደርጉ ስለሚችሉት በመተንፈሻ አካላት ወለል ላይ መጎተት አልተቻለም።በአንዳንድ ሁኔታዎች ማግኔቱ ወደ ግራ እና ቀኝ ሲንቀሳቀስ የኤምፒ ሰንሰለቱ ይረዝማል።የሚገርመው፣ ማግኔቱ ከትራክቱ ጋር በርዝመታዊ መንገድ ሲንቀሳቀስ፣ እና ማግኔቱ በቀጥታ ወደ ላይ ሲንቀሳቀስ እና ቅንጣቢው ሰንሰለቱ ወደ አቀባዊ አቀማመጥ ሲሽከረከር፣ ቅንጣት ሰንሰለቱ የፈሳሹን ወለል ንጣፍ ጥልቀት እንደሚቀይር ደርሰንበታል። ተጨማሪ ቪዲዮ S7).: MP5 በ 0:09፣ ከታች በስተቀኝ)።ማግኔቱ በመተንፈሻ ቱቦው ላይ ወደ ጎን (ማለትም ወደ ግራ ወይም ቀኝ እንስሳ፣ ከመተንፈሻ ቱቦው ርዝመት ይልቅ) ወደ ጎን ሲንቀሳቀስ የባህሪው የእንቅስቃሴ ንድፍ ተለወጠ።ቅንጣቶቹ አሁንም በእንቅስቃሴያቸው በግልጽ ይታዩ ነበር፣ ነገር ግን ማግኔቱ ከመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ሲወጣ፣ የንዑሳን ሕብረቁምፊዎች ጫፎች ታዩ (ተጨማሪ ቪዲዮ S8 ይመልከቱ፡ MP5፣ ከ0፡08 ጀምሮ)።ይህ በመስታወት ካፒታል ውስጥ በተተገበረ መግነጢሳዊ መስክ ተግባር ስር ካለው መግነጢሳዊ መስክ ከሚታየው ባህሪ ጋር ይስማማል።
የቀጥታ ማደንዘዣ አይጥ መተንፈሻ ቱቦ ውስጥ MP5 የሚያሳዩ የናሙና ምስሎች።(ሀ) ማግኔቱ ከመተንፈሻ ቱቦው በላይ እና በግራ በኩል ምስሎችን ለማግኘት ይጠቅማል ፣ ከዚያ (ለ) ማግኔቱን ወደ ቀኝ ካንቀሳቀሱ በኋላ።ቀይ ሳጥኑ ንፅፅርን የሚያሻሽል ማጉላትን ያመለክታል.እነዚህ ምስሎች በS7's Supplementary Video፡ MP5 ውስጥ ከሚታየው ቪዲዮ የተገኙ ናቸው።
ሁለቱ ምሰሶዎች ከመተንፈሻ ቱቦው በላይ እና በታች ባለው የሰሜን-ደቡብ አቅጣጫ (ማለትም የሚስብ ምስል 3 ለ) ሲቃኙ የኤምፒ ኮርዶች ረዘም ያለ ጊዜ ታየ እና ከኋላው ወለል ላይ ሳይሆን በመተንፈሻ ቱቦው የጎን ግድግዳ ላይ ተቀምጠዋል ። የመተንፈሻ ቱቦ (አባሪውን ይመልከቱ).ቪዲዮ S9: MP5)ነገር ግን፣ ከፍተኛ መጠን ያለው ቅንጣቶች በአንድ ቦታ (ማለትም፣ የመተንፈሻ ቱቦው የጀርባ ወለል) ፈሳሽ አስተዳደር ባለሁለት ማግኔት መሣሪያን ከተጠቀመ በኋላ አልተገኘም ፣ ይህም ብዙውን ጊዜ ከአንድ ማግኔት መሳሪያ ጋር ነው።ከዚያም አንድ ማግኔት ተቃራኒ ምሰሶዎችን ለመቀልበስ (ምስል 3 ሐ) ሲዋቀር በእይታ መስክ ላይ የሚታዩት ቅንጣቶች ቁጥር ከተረከቡ በኋላ አልጨመሩም.ማግኔቶችን በቅደም ተከተል በሚስብ ወይም በሚገፋው ከፍተኛ የመግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬ ምክንያት ሁለቱንም ሁለት የማግኔት ውቅሮች ማዘጋጀት ፈታኝ ነው።ዝግጅቱ ከአየር መንገዱ ጋር ትይዩ ወደሆነ አንድ ማግኔት ተቀይሯል ነገር ግን በ90 ዲግሪ ማእዘን በመተንፈሻ መንገዱ በኩል በማለፍ የሀይል መስመሮቹ የመተንፈሻ ቱቦ ግድግዳውን በዘዴ አቋርጠውታል (ምስል 3d) ይህ አቅጣጫ ቅንጣት የመሰብሰብ እድልን ለመወሰን ታስቦ ነው። የጎን ግድግዳ.ይከበር።ነገር ግን፣ በዚህ ውቅር ውስጥ፣ ምንም የሚለይ የኤምኤፍ ክምችት እንቅስቃሴ ወይም የማግኔት እንቅስቃሴ አልነበረም።በእነዚህ ሁሉ ውጤቶች ላይ በመመርኮዝ በጂን ተሸካሚዎች ላይ ለሚደረጉ ጥናቶች ነጠላ ማግኔት እና 30 ዲግሪ አቅጣጫ ያለው ውቅር ተመርጧል (ምስል 3 ሀ)።
እንስሳው በሰብአዊነት ከተሰዋ በኋላ ወዲያውኑ ብዙ ጊዜ በምስል ሲገለጽ ፣ የቲሹ እንቅስቃሴ ጣልቃ አለመግባት ማለት በመግነጢሳዊው የትርጉም እንቅስቃሴ መሠረት “ይወዛወዛሉ” ማለት ነው ።የ MP6 ቅንጣቶችን መኖር እና መንቀሳቀስ በግልፅ ይመልከቱ።
የLV-LacZ ደረጃ 1.8 x 108 IU/ml ነበር፣ እና 1፡1 ከCombiMag MP (MP6) ጋር ከተደባለቀ በኋላ እንስሳት 50 μl የመተንፈሻ መጠን 9 x 107 IU/ml LV ተሽከርካሪ (ማለትም 4.5) ተወጉ። x 106 TU/አይጥ)።))።በነዚህ ጥናቶች፣ በምጥ ወቅት ማግኔትን ከማንቀሳቀስ ይልቅ፣ የLV ትራንስፎርሜሽን (ሀ) መግነጢሳዊ መስክ በሌለበት ጊዜ ከቬክተር አቅርቦት ጋር ሲነፃፀር ሊሻሻል ይችል እንደሆነ ለማወቅ ማግኔቱን በአንድ ቦታ አስተካክለነዋል። ትኩረት ይስጡ ።በላይኛው የመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ በሚገኙ መግነጢሳዊ ዒላማ ቦታዎች ውስጥ የሚተላለፉ ሴሎች.
የማግኔቶችን መኖር እና CombiMagን ከኤልቪ ቬክተር ጋር በማጣመር ጥቅም ላይ መዋሉ የእንስሳት ጤና ላይ አሉታዊ ተጽእኖ የሚያሳድር አይመስልም ነበር፣ የእኛ መደበኛ የኤልቪ ቬክተር አቅርቦት ፕሮቶኮል እንዳደረገው ሁሉ።ለሜካኒካል መዛባት የተጋለጠው የትራፊክ አካባቢ የፊት ለፊት ምስሎች (ተጨማሪ ምስል 1) የ LV-MP ህክምና ቡድን በማግኔት (ምስል 9 ሀ) ውስጥ ከፍተኛ የሆነ የመተላለፊያ ደረጃ እንዳለው ያሳያል.በቁጥጥሩ ቡድን ውስጥ አነስተኛ መጠን ያለው ሰማያዊ LacZ ማቅለሚያ ብቻ ነበር (ምስል 9 ለ).የ X-Gal-የቆሸሹ መደበኛ ክልሎች መጠን የ LV-MP አስተዳደር መግነጢሳዊ መስክ ሲኖር በግምት 6 እጥፍ መሻሻል አሳይቷል (ምስል 9 ሐ)።
በ LV-MP (a) መግነጢሳዊ መስክ ሲኖር እና (ለ) ማግኔት በሌለበት ጊዜ የመተንፈሻ ቱቦን ማስተላለፍን የሚያሳዩ የተዋሃዱ ምስሎች ምሳሌ።(ሐ) በማግኔት (* p = 0.029, t-test, n = 3 በቡድን, አማካይ ± መደበኛ ስህተት) በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ በተለመደው የ LacZ ትራንስፎርሜሽን ቦታ ላይ በስታቲስቲክስ ጉልህ የሆነ መሻሻል.
ገለልተኛ ፈጣን ቀይ ቀለም ያላቸው ክፍሎች (ምሳሌ በተጨማሪ ምስል 2 ላይ የሚታየው) በላክዜድ ቀለም የተቀቡ ህዋሶች ቀደም ሲል እንደተዘገበው በተመሳሳይ ናሙና እና በተመሳሳይ ቦታ ላይ እንደሚገኙ ያመለክታል።
በአየር ወለድ የጂን ህክምና ውስጥ ያለው ቁልፍ ተግዳሮት በፍላጎት ቦታዎች ውስጥ ተሸካሚ ቅንጣቶችን በትክክል መተረጎም እና የአየር ፍሰት እና ንቁ የንፋጭ ማጽጃ በሚኖርበት ጊዜ በሞባይል ሳንባ ውስጥ ከፍተኛ የሆነ የመተላለፊያ ቅልጥፍናን ማሳካት ነው።በሳይስቲክ ፋይብሮሲስ ውስጥ የመተንፈሻ አካላት በሽታዎችን ለማከም የታቀዱ የኤልቪ ተሸካሚዎች በአየር መንገዱ ውስጥ የሚገኙትን ተሸካሚ ቅንጣቶች የሚቆዩበትን ጊዜ መጨመር እስካሁን ሊደረስ የማይችል ግብ ነው።በካስቴላኒ እና ሌሎች እንደተገለፀው ፣መግነጢሳዊ መስኮችን በመጠቀም ሽግግርን ለማሻሻል ከሌሎች የጂን አቅርቦት ዘዴዎች እንደ ኤሌክትሮፖሬሽን ካሉ ጥቅሞች አሉት ምክንያቱም ቀላልነትን ፣ ኢኮኖሚን ​​፣ አካባቢያዊ አቅርቦትን ፣ ውጤታማነትን ይጨምራል እና አጭር የመታቀፊያ ጊዜ።እና ዝቅተኛ የተሽከርካሪ መጠን10.ነገር ግን፣ በ vivo የውጭ መግነጢሳዊ ሃይሎች ተጽእኖ ስር ያሉ መግነጢሳዊ ቅንጣቶች በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ማከማቸት እና ባህሪ በፍፁም አልተገለጸም እና በእውነቱ ይህ ዘዴ ያልተነካ የአየር አየር መንገዶች ውስጥ የጂን አገላለጽ ደረጃን የመጨመር ችሎታ በ Vivo ውስጥ አልታየም።
በ PCXI synchrotron ላይ ያደረግናቸው የ in vitro ሙከራዎች ከMP polystyrene በስተቀር የሞከርናቸው ሁሉም ቅንጣቶች በተጠቀምንበት ኢሜጂንግ ውስጥ ይታያሉ።መግነጢሳዊ መስክ በሚኖርበት ጊዜ መግነጢሳዊ መስኮች ሕብረቁምፊዎች ይሠራሉ, ርዝመታቸው ከቅንጦቹ ዓይነት እና ከመግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬ (ማለትም የማግኔት ቅርበት እና እንቅስቃሴ) ጋር የተያያዘ ነው.በስእል 10 እንደሚታየው እያንዳንዱ ግለሰብ ቅንጣት መግነጢሳዊ ሆኖ የራሱን የአካባቢ መግነጢሳዊ መስክ ሲፈጥር የምናያቸው ሕብረቁምፊዎች ይፈጠራሉ።እነዚህ የተለያዩ መስኮች ከአካባቢው የመሳብ ሃይሎች እና የሌሎችን ቅንጣቶች መቀልበስ የተነሳ ሌሎች ተመሳሳይ ቅንጣቶች እንዲሰበሰቡ እና ከቡድን string እንቅስቃሴዎች ጋር እንዲገናኙ ያደርጋሉ።
ሥዕላዊ መግለጫው (ሀ፣ ለ) በፈሳሽ የተሞሉ ካፊላሪዎች ውስጥ የሚፈጠሩ ቅንጣቶች ሰንሰለቶች እና (ሐ፣ መ) በአየር የተሞላ የመተንፈሻ ቱቦ።ካፊላሪዎች እና የመተንፈሻ ቱቦዎች ወደ ሚዛን እንዳልተሳቡ ልብ ይበሉ.ፓነል (ሀ) በሰንሰለት ውስጥ የተደረደሩ የ Fe3O4 ቅንጣቶችን የያዘ የኤምኤፍ መግለጫንም ይዟል።
ማግኔቱ በካፒታል ላይ በሚንቀሳቀስበት ጊዜ የንጥል ሕብረቁምፊው አንግል ለ MP3-5 Fe3O4 ን የያዘ ወሳኝ ደረጃ ላይ ደርሷል ፣ ከዚያ በኋላ የቅንጣት ሕብረቁምፊው በቀድሞው ቦታው አልቀረም ፣ ነገር ግን በላዩ ላይ ወደ አዲስ ቦታ ተንቀሳቅሷል።ማግኔት.ይህ ተፅዕኖ ሊከሰት የሚችልበት ምክንያት ይህ እንቅስቃሴ እንዲከሰት ለማድረግ የመስታወት ካፒታል ገጽታ ለስላሳ ስለሆነ ነው.የሚገርመው፣ MP6 (CombiMag) በዚህ መንገድ አላደረገም፣ ምናልባትም ቅንጣቶቹ ያነሱ በመሆናቸው፣ የተለየ ሽፋን ወይም የገጽታ ክፍያ ስላላቸው ወይም የባለቤትነት ማጓጓዣው ፈሳሽ የመንቀሳቀስ ችሎታቸውን ነካ።በ CombiMag ቅንጣት ምስል ላይ ያለው ንፅፅርም ደካማ ነው፣ ይህም ፈሳሹ እና ቅንጣቶች አንድ አይነት ጥግግት ሊኖራቸው ስለሚችል በቀላሉ ወደሌላው መንቀሳቀስ እንደማይችሉ ይጠቁማል።ማግኔቱ በጣም በፍጥነት የሚንቀሳቀስ ከሆነ ቅንጣቶች ሊጣበቁ ይችላሉ, ይህም የመግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬ ሁል ጊዜ በፈሳሽ ውስጥ ባሉ ቅንጣቶች መካከል ያለውን ግጭት ማሸነፍ እንደማይችል ያሳያል, ይህም የማግኔት ፊልዱ ጥንካሬ እና በማግኔት እና በዒላማው አካባቢ መካከል ያለው ርቀት ሊመጣ እንደማይገባ ይጠቁማል. መደነቅ።አስፈላጊ.እነዚህ ውጤቶች ምንም እንኳን ማግኔቶች በዒላማው አካባቢ የሚፈሱ ብዙ ማይክሮፓራሎችን መያዝ ቢችሉም ማግኔቶች የኮምቢማግ ቅንጣቶችን በመተንፈሻ ቱቦው ላይ ለማንቀሳቀስ መታመን የማይቻል ነው ።ስለዚህ፣ በ Vivo LV MF ጥናቶች የተወሰኑ የአየር መንገዱን ቦታዎች በአካል ለማነጣጠር የማይንቀሳቀሱ መግነጢሳዊ መስኮችን መጠቀም አለባቸው ብለን ደመደምን።
ቅንጦቹ ወደ ሰውነት ውስጥ ከገቡ በኋላ ውስብስብ በሆነው የሰውነት ተንቀሳቃሽ ቲሹ አውድ ውስጥ ለመለየት አስቸጋሪ ናቸው, ነገር ግን ማግኔትን በአግድም በመተንፈሻ ቱቦ ላይ በማንቀሳቀስ የ MP ገመዶችን "ለመወዛወዝ" የማወቅ ችሎታቸው ተሻሽሏል.ቅጽበታዊ ቀረጻ ቢቻልም፣ እንስሳው በሰብአዊነት ከተገደለ በኋላ የንጥረትን እንቅስቃሴ ለመለየት ቀላል ነው።ማግኔቱ በምስል ቦታው ላይ በሚቀመጥበት ጊዜ የኤምፒ ትኩረቶች ብዙውን ጊዜ በዚህ ቦታ ከፍተኛ ነበሩ፣ ምንም እንኳን አንዳንድ ቅንጣቶች ብዙውን ጊዜ ከመተንፈሻ ቱቦ በታች ይገኛሉ።ልክ እንደ ኢንቪትሮ ጥናቶች፣ ቅንጣቶች በማግኔት እንቅስቃሴ ወደ ቱቦው መጎተት አይችሉም።ይህ ግኝት የመተንፈሻ ቱቦን የሚሸፍነው ንፋጭ ቅንጣቶችን ወደ ውስጥ በሚተነፍሱበት ጊዜ፣ በንፋጭ ውስጥ በማጥመድ እና በመቀጠልም በ muco-ciliary clearance method አማካኝነት እንዴት እንደሚያጸዳው ጋር የሚስማማ ነው።
ከመተንፈሻ ቱቦ በላይ እና በታች ማግኔቶችን ለመሳብ (ምስል 3 ለ) መግነጢሳዊ መስክ በአንድ ነጥብ ላይ በከፍተኛ ሁኔታ ከተከማቸ መግነጢሳዊ መስክ ይልቅ አንድ ወጥ የሆነ የንጥሎች ስርጭትን ሊያስከትል እንደሚችል ገምተናል።.ሆኖም፣ የመጀመሪያ ጥናታችን ይህንን መላምት የሚደግፍ ግልጽ ማስረጃ አላገኘም።በተመሳሳይ፣ ጥንድ ማግኔቶችን ለመቀልበስ (ምስል 3 ሐ) በምስሉ አካባቢ ላይ ተጨማሪ ቅንጣትን አላመጣም።እነዚህ ሁለት ግኝቶች እንደሚያሳዩት ባለሁለት-ማግኔት ማቀናበሪያ የኤምፒ ጠቋሚን አካባቢያዊ ቁጥጥርን በእጅጉ እንደማያሻሽል እና በዚህ ምክንያት የሚመጡት ኃይለኛ መግነጢሳዊ ኃይሎች ለመስተካከል አስቸጋሪ ናቸው, ይህ አቀራረብ ተግባራዊ እንዲሆን ያደርገዋል.በተመሳሳይ፣ ማግኔትን ከላይ እና በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ማዞር (ምስል 3d) እንዲሁም በምስሉ ላይ የቀሩትን ቅንጣቶች ቁጥር አልጨመረም።አንዳንድ እነዚህ አማራጭ ውቅሮች በተቀማጭ ዞን ውስጥ የመግነጢሳዊ መስክ ጥንካሬን ስለሚቀንሱ ስኬታማ ላይሆኑ ይችላሉ።ስለዚህ ነጠላ ማግኔት ውቅር በ 30 ዲግሪ (ምስል 3 ሀ) በ Vivo የሙከራ ዘዴ ውስጥ በጣም ቀላሉ እና በጣም ቀልጣፋ ተደርጎ ይቆጠራል።
የኤልቪ-ኤምፒ ጥናት እንደሚያሳየው የኤል.ቪ.ቪ ቬክተሮች ከኮምቢማግ ጋር ሲጣመሩ እና መግነጢሳዊ መስክ በሚኖርበት ጊዜ በአካል ከተረበሹ በኋላ ሲሰጡ ከመቆጣጠሪያዎች ጋር ሲነፃፀር የትራንስፎርሜሽን ደረጃዎች በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ በከፍተኛ ሁኔታ ጨምረዋል.በ synchrotron imaging ጥናቶች እና በ LacZ ውጤቶች ላይ በመመስረት, ማግኔቲክ ፊልሙ LVን በመተንፈሻ ቱቦ ውስጥ ማቆየት እና ወዲያውኑ ወደ ሳንባ ውስጥ ዘልቀው የገቡትን የቬክተር ቅንጣቶች ብዛት መቀነስ ይችላል.እንደዚህ አይነት ኢላማ የተደረገ ማሻሻያዎች የተላኩ ቲተሮችን፣ ኢላማ ያልሆኑ ትራንስፎርሜሽን፣ የሚያነቃቁ እና የበሽታ መከላከል የጎንዮሽ ጉዳቶችን እና የጂን ማስተላለፊያ ወጪዎችን በመቀነስ ወደ ከፍተኛ ቅልጥፍና ያመራል።በአስፈላጊነቱ, እንደ አምራቹ ገለጻ, CombiMag ከሌሎች የቫይረስ ቫይረሶች (እንደ ኤኤቪ) እና ኑክሊክ አሲዶችን ጨምሮ ከሌሎች የጂን ማስተላለፊያ ዘዴዎች ጋር በማጣመር ጥቅም ላይ ሊውል ይችላል.